| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第11-16页 |
| ·植酸简介 | 第11-12页 |
| ·植酸酶简介 | 第12页 |
| ·植酸酶的种类及来源 | 第12-13页 |
| ·植酸酶的酶学特性 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的基因工程 | 第14-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第16-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的简介 | 第16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特性 | 第16-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的遗传学特性 | 第18-19页 |
| ·影响外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中高效表达的因素 | 第19-24页 |
| ·本课题研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| ·研究内容和实验方案 | 第25-27页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| ·实验方案 | 第26-27页 |
| 第二章 重组植酸酶KrAPPAS基因的合成与分析 | 第27-45页 |
| ·实验材料 | 第28-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·引物合成和测序 | 第28页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·培养基配制 | 第29-30页 |
| ·试剂配制 | 第30-33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·K. radicincitans植酸酶KrAPPAS基因的扩增、克隆及序列测定 | 第33页 |
| ·KrAPPAS基因密码子优化 | 第33页 |
| ·引物的设计与基因的合成 | 第33-39页 |
| ·KrAPPAS基因片段的回收 | 第39页 |
| ·Kr APPAS 基因克隆与分析 | 第39-41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·DNA序列检测 | 第41-42页 |
| ·基因序列对比 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第三章KrAPPAS基因在毕赤酵母中的异源表达 | 第45-57页 |
| ·实验材料 | 第45-57页 |
| ·菌株与质粒 | 第45页 |
| ·试剂和仪器 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·毕赤酵母GS115 电击转化 | 第46-47页 |
| ·重组酵母阳性转化子筛选 | 第47-49页 |
| ·重组酵母转化子PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组酵母摇瓶发酵诱导 | 第50-52页 |
| ·重组植酸酶的纯化 | 第52页 |
| ·植酸酶的SDS-PAGE鉴定 | 第52-54页 |
| ·蛋白含量及比活性测定 | 第54-55页 |
| ·重组植酸酶脱糖基化 | 第55-56页 |
| ·动力学常数的测定 | 第56-57页 |
| 第四章 重组植酸酶KrAPPAS的酶学特性分析 | 第57-65页 |
| ·材料和方法 | 第57-60页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·缓冲液配制 | 第57-58页 |
| ·pH对KrAPPAS活性和稳定性的影响 | 第58页 |
| ·温度对KrAPPAS活性和稳定性的影响 | 第58-59页 |
| ·金属离子对KrAPPAS活性的影响 | 第59-60页 |
| ·胃、胰蛋白酶对KrAPPAS活性的影响 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·pH对重组植酸酶KrAPPAS的影响 | 第60-61页 |
| ·温度对重组植酸酶KrAPPAS的影响 | 第61-62页 |
| ·金属离子对重组植酸酶KrAPPAS的影响 | 第62-63页 |
| ·胃、胰蛋白酶对重组植酸酶的影响 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |