| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 第一部分 文献综述和选题目的意义 | 第13-26页 |
| 1 概论 | 第13-21页 |
| ·流行概况 | 第13-14页 |
| ·病原学 | 第14-16页 |
| ·病原分类 | 第14页 |
| ·IBV病毒粒子结构 | 第14-15页 |
| ·生物学特性 | 第15-16页 |
| ·IBV的基因结构 | 第16-17页 |
| ·结构蛋白 | 第17-18页 |
| ·IBV的遗传变异机制 | 第18-20页 |
| ·培养特性 | 第20-21页 |
| 2 IB疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| ·IB灭活疫苗 | 第21页 |
| ·IB弱毒疫苗 | 第21-22页 |
| ·IB亚单位疫苗 | 第22页 |
| ·IB载体疫苗 | 第22-23页 |
| ·IB DNA疫苗 | 第23页 |
| 3 荧光定量PCR研究进展 | 第23-24页 |
| 4 实验目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二部分 试验内容 | 第26-52页 |
| 试验一 鸡传染性支气管炎病毒SCZY3细胞适应株的培育 | 第26-36页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·实验动物、鸡胚和鸡红细胞 | 第26页 |
| ·毒株与菌株 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第27页 |
| ·试剂的配制 | 第27页 |
| ·引物的设计 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-29页 |
| ·Sczy3细胞适应株的培育及传代 | 第27-28页 |
| ·鸡红细胞凝集实验 | 第28页 |
| ·病毒滴度测定 | 第28页 |
| ·Sczy3细胞适应毒株的致弱评价 | 第28-29页 |
| ·遗传稳定性和毒力稳定性 | 第29页 |
| ·细胞水平检测 | 第29页 |
| ·动物水平检测 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-33页 |
| ·IBV Sczy3在CEK细胞上的适应 | 第29-31页 |
| ·细胞上清液对鸡红细胞的凝集活性 | 第31页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第31-32页 |
| ·不同代次IBV Sczy3 CEK细胞适应毒的致弱评价 | 第32页 |
| ·遗传稳定性和毒力稳定性评价结果 | 第32-33页 |
| ·不同代次细胞适应株NP基因的RT-PCR测定 | 第32-33页 |
| ·Sczy3C100的毒力返强测定 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| ·关于CEK细胞的培养 | 第33-34页 |
| ·关于IBV Sczy3在CEK细胞上的适应 | 第34-35页 |
| ·关于IBV Sczy3的病毒滴度 | 第35页 |
| ·关于IBV Sczy3的致弱 | 第35页 |
| ·关于IBV Sczy3的稳定性 | 第35-36页 |
| 试验二 建立荧光定量RT-PCR方法对IBV SCZY3 CEK细胞适应株的增殖规律进行研究 | 第36-45页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-39页 |
| ·病毒RNA提取与cDNA的合成 | 第36-37页 |
| ·N基因质粒标准品的制备 | 第37页 |
| ·荧光定量RT-PCR反应体系和条件的优化 | 第37页 |
| ·标准曲线的建立 | 第37-38页 |
| ·敏感性试验 | 第38页 |
| ·重复性检验 | 第38页 |
| ·应用荧光定量PCR检测研究Sczy3细胞适应株的增殖特点 | 第38-39页 |
| ·比较Sczy3细胞适应株在CEK细胞内不同感染时间的病毒量 | 第38页 |
| ·比较不同代次的Sczy3细胞适应株在不同感染时间CEK细胞的病毒核酸拷贝数 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| ·检测IBV的荧光定量PCR方法的建立 | 第39-42页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第39页 |
| ·建立荧光定量RT-PCR的反应程序与反应体系 | 第39页 |
| ·标准曲线的建立 | 第39-41页 |
| ·敏感性试验结果 | 第41-42页 |
| ·重复性试验结果 | 第42页 |
| ·IBV Sczy3在CEK上的增殖规律的研究 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 实验三 SCZY3 C100免疫保护效力的评价 | 第45-52页 |
| 1 材料 | 第45页 |
| ·试验动物 | 第45页 |
| ·毒株 | 第45页 |
| ·常用试剂和试剂盒 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-47页 |
| ·攻毒毒株病毒滴度的测定 | 第45页 |
| ·试验设计 | 第45-46页 |
| ·样品的采集 | 第46页 |
| ·样品病毒的分离 | 第46页 |
| ·间接ELISA检测抗体 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-49页 |
| ·攻毒毒株病毒滴度的测定 | 第47页 |
| ·Sczy3 C 100免疫保护效力的评价 | 第47-49页 |
| ·发病鸡临诊症状、发病率及死亡率 | 第47-48页 |
| ·血清抗体变化及病毒分离结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
