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修饰庆大霉素寡糖基因的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
英文缩写词及注解第9-10页
第一章 引言第10-27页
   ·氨基寡糖类抗生素简介第10-13页
   ·氨基寡糖生物合成基因研究进展第13-19页
     ·2-脱氧链霉胺生物合成途径及其催化酶第15-17页
     ·合成新霉素的相关基因第17-18页
     ·合成卡那霉素的相关基因第18页
     ·合成福提霉素的相关基因第18-19页
   ·庆大霉素及其生物合成基因第19-26页
     ·庆大霉素结构与组分第19-20页
     ·庆大霉素抗菌作用机制第20-21页
     ·庆大霉素钝化酶第21页
     ·庆大霉素生物合成基因研究进展第21-26页
   ·选题依据和研究内容第26-27页
     ·选题依据第26页
     ·研究内容第26-27页
第二章 材料和方法第27-42页
   ·实验材料第27-32页
     ·菌株与质粒第27-28页
     ·培养基第28-29页
     ·试剂第29-31页
       ·主要试剂和工具酶第29页
       ·主要溶液与缓冲液第29-31页
       ·抗生素第31页
     ·仪器和设备第31-32页
   ·实验方法第32-42页
     ·碱裂解法提取小量大肠杆菌质粒第32页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化第32-33页
     ·DNA酶切第33页
     ·PCR扩增反应第33-34页
       ·PCR反应体系第33-34页
       ·PCR反应程序第34页
     ·DNA片段胶回收第34-35页
     ·单酶切DNA片段去磷酸化第35-36页
     ·酶连第36页
     ·绛红小单孢菌基因组DNA提取第36-37页
     ·DNA琼脂糖胶电泳第37页
     ·大肠杆菌与绛红小单孢菌的接合转移第37-38页
     ·绛红小单孢菌摇瓶发酵第38页
     ·庆大霉素生物效价测定第38-39页
     ·代谢产物提取第39页
     ·代谢产物分析第39-40页
       ·TLC分析法第39-40页
       ·质谱分析法第40页
       ·HPLC分析法第40页
     ·沙土管制备第40-41页
     ·菌种保藏第41-42页
第三章 genQ基因功能的研究第42-51页
   ·重组质粒pQB303的构建第42-46页
     ·绛红小单孢菌G1008基因组的提取第43页
     ·基因genQ同源交换臂的PCR扩增第43-44页
     ·质粒pQB303的构建及验证第44-46页
   ·接合转移和单交换工程菌的验证第46-47页
   ·genQ阻断突变株的筛选第47-48页
   ·绛红小单孢菌GQ175的发酵及代谢产物分析第48-49页
   ·结果与讨论第49-51页
第四章 genB2基因功能的研究第51-60页
   ·重组质粒pZB303的构建第51-54页
     ·基因genB2的同源交换臂的扩增第51-53页
     ·质粒pZB303的构建及验证第53-54页
   ·基因genB2阻断工程菌构建第54-56页
     ·单交换菌株的筛选第54-55页
     ·genB2阻断突变的筛选第55-56页
   ·绛红小单孢菌GB102的发酵及代谢产物分析第56-58页
     ·GB102的代谢产物TLC和HPLC分析第56-57页
     ·GB102的代谢产物MS分析第57-58页
   ·结果与讨论第58-60页
第五章 genD2基因功能的研究第60-67页
   ·重组质粒pDB303的构建第60-63页
     ·基因genD2同源交换臂的扩增第60-61页
     ·质粒pDB303的构建和验证第61-63页
   ·基因genD2阻断工程菌的构建第63-64页
     ·基因genD2失活单交换工程菌的构建第63-64页
     ·genD2阻断突变株的筛选第64页
   ·GD238的发酵及代谢产物分析第64-65页
   ·结果与讨论第65-67页
第六章 庆大霉素A2e合成基因的研究第67-72页
   ·敲除genK基因工程菌的构建第67-70页
     ·同源重组质粒pFD308的验证第67页
     ·单交换工程菌的构建第67-69页
     ·敲除genK基因工程菌的筛选第69-70页
   ·GDK3的发酵及其代谢产物分析第70页
   ·结果与讨论第70-72页
全文总结第72-74页
参考文献第74-80页
致谢第80-81页
附录第81-83页
个人简历第83页

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