| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-19页 |
| ·海洋微生物 | 第10页 |
| ·脂肪酶简介 | 第10-17页 |
| ·酯酶与脂肪酶概述 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第11-12页 |
| ·酯酶与脂肪酶的结构及催化机理 | 第12-14页 |
| ·酯酶与脂肪酶的结构 | 第12-13页 |
| ·酯酶与脂肪酶的催化机理 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的分子生物学研究 | 第14-17页 |
| ·脂肪酶基因的克隆 | 第14-15页 |
| ·海洋微生物脂肪酶基因的克隆 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第17-18页 |
| ·课题研究主要内容 | 第18-19页 |
| 第二章 出发菌株的筛选与鉴定 | 第19-30页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·样品来源 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·试剂和仪器 | 第19-20页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·仪器 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·平板定向筛选 | 第21-22页 |
| ·菌株形态学观察 | 第22页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第22-25页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第22页 |
| ·16S rDNA序列的扩增 | 第22-23页 |
| ·目的基因的胶回收 | 第23页 |
| ·TA克隆及连接产物转化 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第24-25页 |
| ·进化树的构建 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·菌株的筛选 | 第25-26页 |
| ·菌株的鉴定 | 第26-29页 |
| ·形态学观察 | 第26-27页 |
| ·基因组提取及系统发育树的构建 | 第27-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第三章 BURKHOLDERIA SP.S30脂肪酶基因的克隆与表达 | 第30-46页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第30-31页 |
| ·实验试剂 | 第30页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| ·实验试剂和培养基 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·脂肪酶基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·表达重组质粒的构建及验证 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·酶切验证 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母工程菌株的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒线性化 | 第33页 |
| ·毕赤酵母X33感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·电转化毕赤酵母 | 第33页 |
| ·重组菌株的筛选 | 第33-34页 |
| ·重组菌产酶条件的初步优化 | 第34页 |
| ·培养基初始pH的优化 | 第34页 |
| ·甲醇添加量的优化 | 第34页 |
| ·生长曲线及产酶曲线的绘制 | 第34页 |
| ·重组脂肪酶酶学性质研究 | 第34-36页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第34-35页 |
| ·温度对脂肪酶活性的影响 | 第35页 |
| ·pH对脂肪酶活性的影响 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-44页 |
| ·脂肪酶基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·信号肽的预测 | 第38页 |
| ·蛋白高级结构的预测 | 第38-39页 |
| ·表达重组质粒的构建及验证 | 第39-41页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·培养基甲醇添加量的优化 | 第41页 |
| ·培养基初始pH的优化 | 第41-42页 |
| ·重组菌生长曲线及产酶曲线的绘制 | 第42-43页 |
| ·蛋白电泳检测目的条带 | 第43页 |
| ·酶学性质研究 | 第43-44页 |
| ·讨论与小结 | 第44-46页 |
| 第四章 ACINETOBACTER SP.S9酯酶基因的克隆、表达以及分离纯化 | 第46-64页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第46-47页 |
| ·实验试剂 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验试剂和培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·酯酶基因的克隆及表达重组质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母工程菌的构建 | 第48页 |
| ·重组菌产酶条件的初步优化 | 第48页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第48-50页 |
| ·盐析及脱盐 | 第48-49页 |
| ·离子交换层析 | 第49页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第49-50页 |
| ·酶动力学性质研究 | 第50页 |
| ·米氏常数的测定 | 第50页 |
| ·酶学性质的研究 | 第50页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-62页 |
| ·酯酶基因的克隆 | 第51-54页 |
| ·重组质粒的构建及验证 | 第54-56页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第56-58页 |
| ·培养条件的优化 | 第56-57页 |
| ·重组菌生长曲线及产酶曲线的绘制 | 第57-58页 |
| ·蛋白电泳检测目的条带 | 第58页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第58-60页 |
| ·离子交换层析 | 第58-59页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第59-60页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第60-62页 |
| ·酶学性质的研究 | 第60-61页 |
| ·酶动力学参数 | 第61-62页 |
| ·讨论与小结 | 第62-64页 |
| 第五章 结论与展望 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |