| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩写符号 | 第11-16页 |
| 1 前言 | 第16-37页 |
| ·植物雌雄配子的表达谱研究 | 第16-26页 |
| ·植物精细胞研究进展 | 第16-21页 |
| ·受精前卵细胞中的基因表达研究 | 第21-24页 |
| ·植物雌配子体对胚胎和胚乳早期发育的影响 | 第24-26页 |
| ·早期胚胎发生中表达的基因 | 第26-28页 |
| ·胚胎发生由母本基因控制到合子基因控制的转换 | 第28-31页 |
| ·动物中对MZT的研究 | 第28-30页 |
| ·被子植物中MZT的研究 | 第30-31页 |
| ·少量材料的cDNA扩增 | 第31-34页 |
| ·构建全长cDNA文库的意义和技术 | 第34-36页 |
| ·本论文的基础、研究目的及意义 | 第36-37页 |
| 2 精细胞,卵细胞,合子和二胞原胚CDNA文库构建 | 第37-56页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·植物材料、试剂与仪器 | 第38-39页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·主要试剂、仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法与步骤 | 第39-46页 |
| ·烟草精细胞、卵细胞、合子和二胞原胚的分离 | 第39-40页 |
| ·mRNA的提取 | 第40页 |
| ·逆转录 | 第40-41页 |
| ·LD-PCR扩增cDNA | 第41-42页 |
| ·蛋白酶K消化 | 第42页 |
| ·Sfi Ⅰ酶切 | 第42-43页 |
| ·酶切后cDNA片段的分级分离 | 第43页 |
| ·与λ TriplEx2载体连接 | 第43-44页 |
| ·包装菌种的准备 | 第44页 |
| ·文库包装 | 第44页 |
| ·滴定文库 | 第44-45页 |
| ·重组效率的鉴定 | 第45页 |
| ·PCR鉴定文库中插入片断的长度 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-54页 |
| ·细胞的分离 | 第46页 |
| ·烟草精细胞文库构建结果cDNA扩增 | 第46-48页 |
| ·cDNA扩增 | 第46-47页 |
| ·cDNA的分级分离 | 第47页 |
| ·文库滴度,插入片断长度与重组率鉴定 | 第47-48页 |
| ·烟草卵细胞文库构建结果 | 第48-50页 |
| ·cDNA扩增 | 第48-49页 |
| ·cDNA的分级分离 | 第49页 |
| ·文库滴度,插入片断长度与重组率鉴定 | 第49-50页 |
| ·烟草合子cDNA文库构建结果 | 第50-52页 |
| ·cDNA扩增 | 第50-51页 |
| ·cDNA的分级分离 | 第51-52页 |
| ·文库滴度,插入片断长度与重组率鉴定 | 第52页 |
| ·烟草二胞原胚cDNA文库构建结果 | 第52-54页 |
| ·cDNA扩增 | 第52-53页 |
| ·cDNA的分级分离 | 第53页 |
| ·文库滴度,插入片断长度与重组率鉴定 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 3 CDNA文库测序及生物信息学分析 | 第56-71页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第56-57页 |
| ·实验方法与步骤 | 第57页 |
| ·将噬菌体转化为pTriplEx2质粒 | 第57页 |
| ·随机挑选克隆测序 | 第57页 |
| ·序列的生物信息学分析及结果 | 第57-67页 |
| ·EST数据的生物信息学分析流程 | 第57-58页 |
| ·EST整体分析结果 | 第58-61页 |
| ·精细胞文库中EST分析 | 第61-63页 |
| ·卵细胞文库EST分析 | 第63-64页 |
| ·合子文库EST分析 | 第64-66页 |
| ·二胞原胚EST分析 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-71页 |
| ·精细胞转录谱的特点 | 第67-68页 |
| ·卵细胞转录谱的特点 | 第68-69页 |
| ·受精前后从卵细胞到合子和二胞原胚的过程中转录谱的变化 | 第69-71页 |
| 4 RT-PCR验证部分EST在烟草中的表达模式 | 第71-87页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第71-72页 |
| ·植物材料 | 第71页 |
| ·试剂与仪器 | 第71-72页 |
| ·实验方法与步骤 | 第72-76页 |
| ·烟草精细胞、卵细胞、合子和二胞原胚cDNA的扩增 | 第72-74页 |
| ·烟草精细胞、卵细胞、合子和二胞原胚的分离 | 第72页 |
| ·烟草精细胞,卵细胞,合子和二胞原胚mRNA提取 | 第72页 |
| ·分离细胞的cDNA SUPER-SMART扩增 | 第72-74页 |
| ·烟草雌蕊、花药、茎尖、叶、根cDNA的制备 | 第74-76页 |
| ·RNA提取 | 第74-75页 |
| ·RNA乙二醛变性胶电泳 | 第75页 |
| ·DNase处理去除RNA样品中的DNA | 第75页 |
| ·逆转录获得cDNA | 第75-76页 |
| ·RT-PCR检测各个文库中部分EST的表达模式 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-83页 |
| ·烟草雌蕊、花药、茎尖、叶、根RNA提取结果 | 第76-77页 |
| ·House-keeping基因调整PCR条件 | 第77页 |
| ·烟草精细胞文库中部分contig的表达模式 | 第77-79页 |
| ·烟草卵细胞文库中部分contig的表达模式 | 第79-81页 |
| ·烟草合子文库中部分contig的表达模式 | 第81-82页 |
| ·烟草二胞原胚文库中部分contig的表达模式 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-87页 |
| ·烟草精细胞中存在大量优势表达的基因 | 第83页 |
| ·早期胚胎发生过程中母本控制到合子控制的转换(MZT) | 第83-85页 |
| ·卵细胞中部分优势表达的基因在受精后降解 | 第83-84页 |
| ·合子中存在受精后新转录产生的转录本 | 第84-85页 |
| ·二胞原胚中未发现分裂后产生的新基因 | 第85-87页 |
| 5 合子优势表达基因的克隆和表达模式研究 | 第87-106页 |
| ·引言 | 第87-88页 |
| ·实验材料,试剂和仪器 | 第88-89页 |
| ·RACE扩增合子新转录基因的5’端 | 第89-94页 |
| ·烟草5'RACE cDNA POOL构建 | 第89-90页 |
| ·RNA提取 | 第89页 |
| ·5'RACE cDNA pool的制备 | 第89-90页 |
| ·目的基因cDNA 5'端序列的获得 | 第90-94页 |
| ·Genome walking获得NtDynamin基因的启动子 | 第94-98页 |
| ·烟草Genome walking文库的构建 | 第94-96页 |
| ·烟草基因组提取 | 第94-95页 |
| ·基因组的质量检测 | 第95页 |
| ·酶切基因组DNA | 第95页 |
| ·纯化酶切后的DNA | 第95-96页 |
| ·将接头连接至基因组DNA | 第96页 |
| ·Dynamin基因的启动子的获得 | 第96-98页 |
| ·Dynamin启动子分析 | 第98-101页 |
| ·启动子融合报告基因(GFP和GUS)载体的构建 | 第98-99页 |
| ·拟南芥浸花法转基因和烟草叶盘法转基因 | 第99-101页 |
| ·农杆菌电击感受态的制备及电击转化 | 第99页 |
| ·农杆菌的制备 | 第99-100页 |
| ·拟南芥浸花法转基因 | 第100页 |
| ·烟草无菌叶的制备及与农杆菌共培养 | 第100页 |
| ·烟草转化叶片的筛选,抗性苗的切取和生根筛选 | 第100-101页 |
| ·确定烟草阳性植株,转入土中培养 | 第101页 |
| ·GUS染色方法 | 第101页 |
| ·实验结果与分析 | 第101-104页 |
| ·5'-RACE结果 | 第101-102页 |
| ·Genome walking得到NtDynamin基因启动子 | 第102页 |
| ·NtDynamin启动子在拟南芥的表达模式 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| 6 总讨论 | 第106-109页 |
| 在读期间发表与投稿论文 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
