| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-36页 |
| 第一章 猪链球菌病及猪链球2型研究进展 | 第12-26页 |
| 1 病原发展历史 | 第12-13页 |
| 2 病原学 | 第13页 |
| 3 流行病学 | 第13-14页 |
| 4 临床症状 | 第14页 |
| 5 病理变化 | 第14-15页 |
| 6 毒力因子 | 第15-18页 |
| ·荚膜多糖 | 第15页 |
| ·溶菌酶释放蛋白和胞外因子 | 第15-16页 |
| ·猪溶血素 | 第16页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白 | 第16页 |
| ·透明质酸酶 | 第16-17页 |
| ·IgG结合蛋白 | 第17页 |
| ·粘附素 | 第17页 |
| ·清浑浊因子 | 第17-18页 |
| 7 实验室诊断 | 第18-19页 |
| ·细菌的分离、培养和显微镜检 | 第18页 |
| ·生化学诊断 | 第18页 |
| ·清学诊断 | 第18-19页 |
| ·分子生物学诊断 | 第19页 |
| 8 治疗 | 第19页 |
| 9 预防 | 第19-21页 |
| ·饲养管理 | 第19页 |
| ·疫苗 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第二章 Ptx3蛋白的研究现状 | 第26-36页 |
| 1 Pentraxin蛋白家族 | 第26-27页 |
| 2 Ptx3蛋白结构和表达 | 第27-28页 |
| 3 Ptx3识别病原体 | 第28-29页 |
| 4 Ptx3与补体成分的相互作用 | 第29页 |
| 5 自身和非自身识别 | 第29-30页 |
| 6 Ptx3在炎症反应和白细胞聚集的作用 | 第30-31页 |
| 7 Ptx3作为人类疾病病理学指征 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-36页 |
| 第二篇 研究内容 | 第36-84页 |
| 第一章 鼠源Ptx3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第36-52页 |
| 摘要 | 第36-37页 |
| 1 材料和方法 | 第37页 |
| ·质粒和试剂 | 第37页 |
| ·实验器材 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-43页 |
| ·Ptx3蛋白基因的扩增 | 第37-38页 |
| ·Ptx3蛋白基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·重组原核表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒基因序列测定 | 第40页 |
| ·Ptx3基因在BL21中的诱导表达和检测 | 第40-41页 |
| ·原核表达Ptx3蛋白的可溶性检测 | 第41页 |
| ·原核表达Ptx3蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·原核表达Ptx3蛋白多克隆抗血清的制备 | 第41-42页 |
| ·ELISA检测原核表达Ptx3蛋白抗血清效价 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| ·Ptx3基因的PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·重组质粒pET-32a-Ptx3双酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-32a-Ptx3的测序结果 | 第44-45页 |
| ·PCR筛选阳性菌株 | 第45页 |
| ·重组质粒pET-32a-Ptx3在BL21中的表达鉴定 | 第45-46页 |
| ·原核表达Ptx3蛋白纯化后SDS-PAGE鉴定图 | 第46-47页 |
| ·方阵滴定法确定ELISA检测原核表达Ptx3蛋白最佳包被浓度 | 第47页 |
| ·兔抗原核表达Ptx3蛋白血清效价ELISA检测结果 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| ABSTRACT | 第51-52页 |
| 第二章 鼠源Ptx3蛋白的真核表达 | 第52-70页 |
| 摘要 | 第52页 |
| 1 材料和试剂 | 第52-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第52-53页 |
| ·细胞与培养条件 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-59页 |
| ·Ptx3真核表达基因片段的扩增 | 第53-54页 |
| ·Ptx3蛋白真核表达基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·重组真核表达质粒的构建 | 第55页 |
| ·G418筛选浓度的确定 | 第55-56页 |
| ·重组真核表达质粒转染CHO细胞 | 第56页 |
| ·G418对转染后CHO细胞的筛选培养 | 第56-57页 |
| ·流式细胞仪对G418筛选后CHO细胞的分选 | 第57页 |
| ·荧光定量RT-PCR对阳性细胞株Ptx3基因转录水平的检测 | 第57-58页 |
| ·CHO-pIRES-egfp-Ptx3单克隆细胞株的扩大培养与表达上清的收集 | 第58页 |
| ·单克隆细胞上清收集液的葡聚糖凝胶层析过滤和浓缩 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第59页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-66页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pIRES-egfp-Ptx3双酶切鉴定图 | 第60-61页 |
| ·重组质粒pIRES-egfp-Ptx3基因测序结果 | 第61页 |
| ·G418筛选浓度的确定 | 第61-63页 |
| ·重组真核表达载体pIRES-egfp-Ptx3转染CHO细胞 | 第63-64页 |
| ·流式细胞仪分选后亚克隆细胞的焚光显微镜观察图 | 第64页 |
| ·单克隆细胞株稳定性测定 | 第64页 |
| ·荧光定量RT-PCR对阳性单克隆细胞株Ptx3基因转录水平的检测 | 第64-65页 |
| ·单克隆细胞无血清培养上清浓缩液的葡聚糖凝胶层析过滤 | 第65页 |
| ·葡聚糖凝胶层析过滤后SDS-PAGE检测 | 第65-66页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| ABSTRACT | 第69-70页 |
| 第三章 鼠源Ptx3蛋白对感染猪链球菌2型小鼠保护作用的研究 | 第70-84页 |
| 摘要 | 第70-71页 |
| 1 材料与试剂 | 第71页 |
| ·菌株与培养条件 | 第71页 |
| ·实验动物 | 第71页 |
| ·试剂与仪器 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-74页 |
| ·细菌培养 | 第71页 |
| ·Ana-1细胞的培养 | 第71页 |
| ·Ptx3对Ana-1吞噬HA9801能力的调节作用 | 第71-72页 |
| ·Ptx3对HA9801引起小鼠炎症反应的调节作用 | 第72-73页 |
| ·Ptx3蛋白作用下HA9801感染小鼠组织活菌测定 | 第73页 |
| ·攻毒保护实验 | 第73-74页 |
| 3 结果 | 第74-78页 |
| ·Ptx3蛋白对Ana-1吞噬HA9801的调节作用 | 第74-75页 |
| ·Ptx3蛋白对HA9801引起小鼠炎症反应的调节作用 | 第75-76页 |
| ·Ptx3蛋白作用下HA9801感染小鼠活菌组织分布结果 | 第76-78页 |
| ·Ptx3蛋白对HA9801的攻毒保护实验结果 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| ABSTRACT | 第82-84页 |
| 全文总结 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
