| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 主要缩略词表 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-29页 |
| ·弓形虫基因操作技术研究进展 | 第20-23页 |
| ·弓形虫体外培养技术 | 第20-21页 |
| ·弓形虫速殖子基因操作技术研究 | 第21-23页 |
| ·弓形虫顶质体研究进展 | 第23-27页 |
| ·顶质体的起源 | 第23-24页 |
| ·顶质体基因组 | 第24页 |
| ·迟发型死亡 | 第24页 |
| ·顶质体蛋白转运 | 第24-25页 |
| ·顶质体生命代谢 | 第25-27页 |
| ·本课题的研究意义 | 第27-29页 |
| 第二章 弓形虫ACP和FABZ的原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第29-53页 |
| ·实验仪器和材料 | 第29-34页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·实验耗材 | 第30页 |
| ·实验试剂 | 第30-33页 |
| ·实验细胞和动物 | 第33页 |
| ·实验虫株 | 第33-34页 |
| ·实验菌种和载体 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-45页 |
| ·HeLa细胞培养 | 第34页 |
| ·弓形虫RH株速殖子体外培养 | 第34页 |
| ·弓形虫总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第34-35页 |
| ·弓形虫acp和fabz编码基因的扩增与克隆 | 第35-39页 |
| ·acp/pET28和fabz/pET32原核表达载体的构建与鉴定 | 第39-42页 |
| ·重组ACP和FABZ蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第42-44页 |
| ·兔多克隆抗体制备 | 第44页 |
| ·Western blotti ng法检测弓形虫ACP和FABZ蛋白表达 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-51页 |
| ·弓形虫acp和fabz基因PCR扩增结果 | 第45页 |
| ·重组质粒acp/pET28a和fabz/pET32a鉴定结果 | 第45-49页 |
| ·重组ACP和FABZ蛋白诱导表达结果 | 第49-50页 |
| ·Western blotting分析弓形虫ACP和FABZ的表达 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 弓形虫顶质体荧光突变株的构建 | 第53-67页 |
| ·实验仪器和材料 | 第53-55页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·实验耗材 | 第53页 |
| ·实验试剂 | 第53-55页 |
| ·实验细胞 | 第55页 |
| ·实验虫株 | 第55页 |
| ·实验菌种和载体 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-60页 |
| ·弓形虫hxgprt株速殖子体外传代培养 | 第55页 |
| ·弓形虫基因组DNA提取 | 第55-56页 |
| ·PCR扩增弓形虫基因组DNA中acp基因 | 第56-57页 |
| ·构建弓形虫acp/pTG19-T载体 | 第57页 |
| ·构建弓形虫pHX-ACP-GFP转染质粒 | 第57-58页 |
| ·弓形虫速殖子转染 | 第58-59页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察pHX-ACP-GFP弓形虫突变株 | 第59-60页 |
| ·Western blotting法检测突变株ACP-GFP融合蛋白表达 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·acp基因扩增 | 第60页 |
| ·构建acp/pTG19-T载体 | 第60页 |
| ·构建弓形虫pHX-ACP-GFP转染质粒 | 第60-62页 |
| ·顶质体荧光突变株构建 | 第62页 |
| ·Western blotting法检测ACP-GFP融合蛋白表达 | 第62-63页 |
| ·激光共聚焦显微镜下观察ACP-GFP蛋白表达 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 第四章 核基因编码顶质体蛋白"迟发型死亡"转运机制研究 | 第67-79页 |
| ·实验仪器和材料 | 第67-68页 |
| ·实验仪器 | 第67页 |
| ·实验耗材 | 第67页 |
| ·实验试剂 | 第67-68页 |
| ·实验细胞和动物 | 第68页 |
| ·实验虫株 | 第68页 |
| ·实验菌种和载体 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-72页 |
| ·HFF细胞原代培养 | 第68页 |
| ·弓形虫ACP-GFP突变株体外培养 | 第68-69页 |
| ·原核表达弓形虫GRA1并制备其兔多克隆抗体 | 第69-70页 |
| ·Real-time PCR检测"迟发型死亡"弓形虫ACP和GRA1蛋白表达 | 第70-71页 |
| ·Western blotting检测"迟发型死亡"弓形虫ACP和GRA1蛋白表达 | 第71页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察弓形虫"迟发型死亡"ACP蛋白转运方式 | 第71-72页 |
| ·结果 | 第72-76页 |
| ·重组GRA1蛋白表达及多克隆抗体制备 | 第72-74页 |
| ·"迟发型死亡"不同时间虫体ACP和GRA1蛋白编码基因的表达 | 第74-75页 |
| ·"迟发型死亡"不同时间虫体ACP和GRA1蛋白的表达 | 第75-76页 |
| ·"迟发型死亡"不同时间虫体ACP蛋白的转运 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-79页 |
| 第五章 弓形虫可诱导敲除fabz基因突变株的构建 | 第79-89页 |
| ·实验仪器和材料 | 第79-80页 |
| ·实验仪器 | 第79页 |
| ·实验耗材 | 第79页 |
| ·实验试剂 | 第79-80页 |
| ·实验细胞 | 第80页 |
| ·实验虫株 | 第80页 |
| ·实验菌种和载体 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-83页 |
| ·弓形虫TATi株培养 | 第80页 |
| ·构建可诱导敲除载体pTet07-Sag1-FBAZ-Ty-DHFR | 第80-82页 |
| ·构建可诱导敲除fabz基因弓形虫突变株 | 第82-83页 |
| ·Western blotting检测FABZ-Ty融合蛋白表达 | 第83页 |
| ·Western blotting检测四环素可诱导敲除系统的抑制效果 | 第83页 |
| ·结果 | 第83-87页 |
| ·弓形虫fabz基因扩增 | 第83-84页 |
| ·pTUB8-FABZ-Ty-HX载体构建与鉴定 | 第84页 |
| ·pTet07-Sag1-FABZ-Ty-DHFR载体构建与鉴定 | 第84-86页 |
| ·Western blotting检测TetO-FABZ株FABZ-Ty融合蛋白表达 | 第86页 |
| ·四环素可诱导敲除系统抑制效果 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第六章 Ⅱ型脂酸代谢与弓形虫"迟发型死亡"机制初步研究 | 第89-99页 |
| ·实验仪器和材料 | 第89-90页 |
| ·实验仪器 | 第89页 |
| ·实验耗材 | 第89页 |
| ·实验试剂 | 第89-90页 |
| ·实验细胞 | 第90页 |
| ·实验虫株 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-92页 |
| ·Real-time PCR检测启动Tet0系统后抑制FABZ蛋白编码基因表达效果 | 第90-91页 |
| ·Giemsa染色法观察FABZ表达抑制后虫体增殖情况 | 第91页 |
| ·Real-time法检测FABZ表达抑制后虫体增殖率 | 第91-92页 |
| ·结果 | 第92-95页 |
| ·Tet0系统启动后不同时间FABZ蛋白编码mRNA表达量 | 第92页 |
| ·Giemsa染色法观察FABZ表达抑制后细胞内虫体增殖情况 | 第92-93页 |
| ·Real-time法检测FABZ表达抑制后虫体增殖率 | 第93-95页 |
| ·讨论 | 第95-99页 |
| 结论与展望 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 读博期间发表论文、参加课题 | 第109-110页 |
