| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-38页 |
| 第一章 猪链球菌2型的研究进展 | 第14-26页 |
| 1 病原学 | 第14页 |
| 2 流行病学 | 第14-15页 |
| 3 临床症状 | 第15页 |
| 4 猪链球菌2型的毒力因子 | 第15-21页 |
| ·荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS) | 第15-16页 |
| ·溶菌酶释放蛋白(Muramidase-released protein,MRP)和胞外因子(Extracellular protein facto,EF) | 第16-17页 |
| ·猪溶血素(suislysin,SLY) | 第17页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白(Fibronectin and fibrinogen-bining protein,FBPS) | 第17-18页 |
| ·谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH) | 第18页 |
| ·IgG结合蛋白和44ku胞壁蛋白 | 第18页 |
| ·磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) | 第18-19页 |
| ·毒力相关序列ORF2 | 第19页 |
| ·其他可能的毒力因子 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第二章 酵母双杂交技术研究与应用进展 | 第26-38页 |
| 1 酵母双杂交系统的原理 | 第26-28页 |
| 2 酵母双杂交体系的发展及应用 | 第28-32页 |
| ·针对核内蛋白的酵母双杂交系统 | 第28-29页 |
| ·针对胞浆及膜蛋白的酵母双杂交系统 | 第29-31页 |
| ·针对胞外及跨膜蛋白的酵母双杂交系统 | 第31-32页 |
| 3 酵母双杂交系统的缺陷 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 第二篇 试验研究 | 第38-126页 |
| 第三章 猪链球菌2型omp40基因的分布及克隆表达 | 第38-54页 |
| 摘要 | 第38-39页 |
| 1 材料与方法 | 第39-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第39-40页 |
| ·试剂与仪器 | 第40页 |
| ·模板DNA的提取 | 第40页 |
| ·引物设计及合成 | 第40-41页 |
| ·omp40在猪链球菌中的分布 | 第41页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| ·omp40的克隆表达 | 第42-43页 |
| ·OMP40免疫血清的制备 | 第43页 |
| ·重组OMP40的Western blot分析 | 第43-44页 |
| ·OMP40细胞定位 | 第44页 |
| ·配基印迹结合试验 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| ·omp40序列分析 | 第45页 |
| ·omp40基因在不同猪链球菌中的分布 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第46-47页 |
| ·omp40基因编码胞壁蛋白 | 第47页 |
| ·OMP40与人胶原蛋白Ⅰ型的结合 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| Abstract | 第52-54页 |
| 第四章 猪链球菌2型ZY05719 omp40基因缺失株构建及特性分析 | 第54-72页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| 1 材料和方法 | 第55-60页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第55-56页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第56页 |
| ·ZY05719 omp40基因敲除突变株的构建和鉴定 | 第56-58页 |
| ·突变株△omp40、互补株C△omp40和野毒株ZY05719生物学形状的比较 | 第58-60页 |
| 2 结果 | 第60-65页 |
| ·重组质粒pSET4s：：omp40的鉴定 | 第60页 |
| ·互补质粒的鉴定 | 第60-61页 |
| ·基因缺失株的鉴定 | 第61-62页 |
| ·质粒稳定性分析 | 第62页 |
| ·生长形态的比较 | 第62-63页 |
| ·生长曲线的比较 | 第63页 |
| ·HEp-2的黏附测定 | 第63-64页 |
| ·生物被膜的测定 | 第64页 |
| ·胶原蛋白结合能力的测定 | 第64-65页 |
| ·斑马鱼毒力的测定 | 第65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| Abstract | 第70-72页 |
| 第五章 猪链球菌2型OMP40介导感染小鼠脑微血管内皮细胞研究 | 第72-82页 |
| 摘要 | 第72页 |
| 1 材料和方法 | 第72-74页 |
| ·菌株及细胞株 | 第72-73页 |
| ·菌株对小鼠脑微血管内皮细胞刺激 | 第73页 |
| ·RNA样品的提取和检测 | 第73页 |
| ·RNA扩增及标记 | 第73页 |
| ·杂交、扫描及数据分析 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-77页 |
| ·基因芯片分析 | 第74-75页 |
| ·GO聚类分析 | 第75-76页 |
| ·信号通路分析 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| Abstract | 第81-82页 |
| 第六章 猪链球菌2型纤连蛋白及胶原蛋白结合蛋白的筛选 | 第82-94页 |
| 摘要 | 第82-83页 |
| 1 材料和方法 | 第83-85页 |
| ·菌株和主要试剂 | 第83页 |
| ·制备上清及胞壁蛋白 | 第83页 |
| ·二维电泳 | 第83-84页 |
| ·Western affinty blot | 第84页 |
| ·MALDI-TOF-MS和数据库检索 | 第84-85页 |
| 2 结果 | 第85页 |
| ·二维电泳图谱 | 第85页 |
| ·Collagen及Fn结合蛋白的鉴定 | 第85页 |
| 3 讨论 | 第85-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| Abstract | 第93-94页 |
| 第七章 MRP与猪脑组织互作蛋白的筛选 | 第94-126页 |
| 摘要 | 第94-95页 |
| 1 材料和方法 | 第95-112页 |
| ·菌株、质粒、试剂及引物 | 第95页 |
| ·Total RNA的提取 | 第95-96页 |
| ·mRNA的分离 | 第96-97页 |
| ·cDNA文库(Uncut型)的构建 | 第97-100页 |
| ·cDNA文库(Uncut型)文库质量鉴定 | 第100页 |
| ·Prey vector pPR3-N-R1R2构建 | 第100-102页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第102-103页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库质量鉴定 | 第103-104页 |
| ·诱饵质粒pDHB1-mrp的构建 | 第104-106页 |
| ·酵母感受态细胞的制备和转化 | 第106-107页 |
| ·Western blot检测pDHB1-mrp在酵母菌中的表达情况 | 第107-108页 |
| ·功能性验证 | 第108-109页 |
| ·3-AT筛选背景的确定 | 第109-110页 |
| ·猪脑组织cDNA文库的转化和筛选 | 第110-111页 |
| ·β-galactosidase活性的检测 | 第111页 |
| ·候选阳性克隆质粒的提取、PCR扩增及测序 | 第111-112页 |
| ·候选阳性克隆的酵母再验证 | 第112页 |
| 2 结果 | 第112-120页 |
| ·猪脑组织mRNA分离与纯化结果 | 第112-113页 |
| ·初级cDNA文库的鉴定结果 | 第113-114页 |
| ·pPR3-N-DEST构建结果 | 第114-115页 |
| ·酵母文库的鉴定 | 第115-116页 |
| ·诱饵质粒pDHB1-mrp的构建与鉴定 | 第116-117页 |
| ·Western blot检测pDHB1-mrp在酵母菌中的表达 | 第117页 |
| ·功能性验证 | 第117页 |
| ·3-AT筛选背景的确定 | 第117-118页 |
| ·猪脑组织cDNA文库以及β－galactosidase活性的检测 | 第118-119页 |
| ·插入片段的PCR扩增 | 第119页 |
| ·候选阳性克隆的酵母再验证 | 第119-120页 |
| 3 讨论 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-125页 |
| Abstract | 第125-126页 |
| 全文总结 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 博士期间发表及待发表论文 | 第130页 |
