犬瘟热病毒N蛋白基因核酸疫苗的构建及大熊猫GM-CSF基因对其免疫效果的影响研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 综述 | 第8-23页 |
| 1. 犬瘟热病毒病原 | 第8-10页 |
| ·病毒的结构 | 第8页 |
| ·病毒的基因组结构 | 第8-10页 |
| ·病毒的理化特性和生物学特性 | 第10页 |
| 2. 犬瘟热的症状和致病机制 | 第10-11页 |
| 3. 犬瘟热的流行病学 | 第11-13页 |
| ·易感动物 | 第11-12页 |
| ·大熊猫犬瘟热的研究 | 第12-13页 |
| 4. 犬瘟热病毒疫苗研究进展 | 第13-16页 |
| ·弱毒苗的研究现状 | 第13-14页 |
| ·基因工程疫苗的研究现状 | 第14-16页 |
| 5. 犬瘟热N蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| 6. 细胞因子类佐剂的应用 | 第18页 |
| 7. GM-CSF的研究进展 | 第18-23页 |
| ·产生 | 第18-19页 |
| ·分子结构和理化特性 | 第19页 |
| ·生物学功能 | 第19-20页 |
| ·应用与研究现状 | 第20-23页 |
| 第二章 实验部分 | 第23-75页 |
| 1. 实验材料 | 第23-24页 |
| ·主要实验材料 | 第23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-45页 |
| ·大熊猫GM-CSF基因核酸疫苗的构建 | 第24-31页 |
| ·大熊猫外周血淋巴细胞RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·GM-CSF基因的体外扩增 | 第25-26页 |
| ·pMD-G_(WHOLE)克隆质粒的构建及鉴定 | 第26-29页 |
| ·pMD-G质粒的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·pCI-G的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·犬瘟热N蛋白基因核酸疫苗的构建 | 第31-35页 |
| ·RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·N蛋白基因的体外扩增 | 第32-33页 |
| ·pMD-N克隆质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·pCI-N质粒的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·GM-CSF-N核酸疫苗的构建 | 第35-40页 |
| ·pMD-G~+的构建 | 第35-37页 |
| ·pMD-G-N的构建 | 第37-39页 |
| ·pCI-G-N质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的免疫学特性 | 第40-45页 |
| ·应用碱裂解法大量抽提质粒 | 第40-41页 |
| ·质粒DNA的免疫 | 第41-42页 |
| ·样品的采集 | 第42页 |
| ·CDV抗体检测 | 第42-43页 |
| ·IL-4水平检测 | 第43页 |
| ·IFN-Γ水平检测 | 第43页 |
| ·重组质粒在小鼠体内的分布检测 | 第43-44页 |
| ·重组质粒在小鼠体内的安全性检测 | 第44-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-66页 |
| ·大熊猫GM-CSF基因核酸疫苗的构建 | 第45-51页 |
| ·重组质粒PMD-G_(WHOLE)的构建 | 第45-49页 |
| ·重组质粒PCI-G的构建 | 第49-51页 |
| ·犬瘟热N蛋白基因核酸疫苗的构建 | 第51-57页 |
| ·重组质粒pMD-N的构建 | 第51-52页 |
| ·犬瘟热病毒N蛋白基因的序列分析 | 第52-56页 |
| ·重组质粒PCI-N的构建 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白核酸疫苗的构建 | 第57-61页 |
| ·重组质粒PMD-G-N的构建 | 第57-58页 |
| ·重组质粒PCI-G-N的构建 | 第58页 |
| ·融合蛋白基因序列分析 | 第58-61页 |
| ·重组质粒的免疫学特性 | 第61-66页 |
| 4. 讨论与结论 | 第66-75页 |
| ·目的基因的选择 | 第66-67页 |
| ·病毒抗原基因的选择 | 第66页 |
| ·细胞因子佐剂的选择 | 第66-67页 |
| ·载体的选择 | 第67-68页 |
| ·引物设计 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白接头的设计 | 第69-70页 |
| ·T淋巴细胞表位的预测方法 | 第70-71页 |
| ·重组质粒的免学特性 | 第71-72页 |
| ·质粒DNA的分布和安全性检测 | 第72-73页 |
| ·全文总结 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
