| 符号说明 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 1 前言 | 第18-46页 |
| ·G 蛋白及 G 蛋白偶联受体 | 第18-25页 |
| ·G 蛋白 | 第18-20页 |
| ·G 蛋白偶联受体 | 第20-25页 |
| ·β-arrestin | 第25-30页 |
| ·β-arrestin 的发现 | 第25-26页 |
| ·β-arrestin 1 和 2 的结构和组织分布特点 | 第26-27页 |
| ·β-arrestin 的生物学效应 | 第27-30页 |
| ·BRET 是研究 G 蛋白偶联受体和β-arrestin 相互作用的一种新的试验方法 | 第30-37页 |
| ·BRET 原理 | 第31-32页 |
| ·BRET 的实验过程 | 第32-33页 |
| ·BRET 派生的三种技术比较 | 第33-35页 |
| ·BRET 在研究 GPCRs 与β-arrestin 相互作用中的应用 | 第35-37页 |
| ·Apelin/APJ 系统 | 第37-43页 |
| ·Apelin 和 APJ 的分子生物学基本特征 | 第37-39页 |
| ·APJ 成为治疗多种疾病的最重要的药物靶点之一 | 第39-43页 |
| ·课题的设计思路及目的意义 | 第43-46页 |
| 2 材料和方法 | 第46-83页 |
| ·材料 | 第46-50页 |
| ·细胞、质粒和菌株 | 第46页 |
| ·抗体 | 第46页 |
| ·生化试剂及试剂盒 | 第46-48页 |
| ·主要仪器 | 第48-50页 |
| ·方法 | 第50-83页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-60页 |
| ·HEK293 细胞的培养 | 第60-62页 |
| ·细胞稳定转染及鉴定 | 第62-68页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜检测 apelin 受体 APJ 与β-arrestins 的共定位 | 第68-69页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第69-71页 |
| ·生物发光共振能量转移检测 APJ 与β-arrestins 的相互作用 | 第71-74页 |
| ·Western blot 检测 ERK1/2 磷酸化 | 第74-77页 |
| ·酶联免疫吸附实验检测 cAMP | 第77-79页 |
| ·双报告基因检测 SRE 和 CRE | 第79-83页 |
| 3 结果与分析 | 第83-121页 |
| ·表达载体的构建及表达分析 | 第83-95页 |
| ·重组 pDsRed-hAPJ 质粒载体的构建及其表达 | 第83-85页 |
| ·apelin 受体 APJ 羧基末端突变体质粒的构建及表达 | 第85-95页 |
| ·HEK293 细胞的培养 | 第95-96页 |
| ·稳定转染细胞系的鉴定 | 第96-98页 |
| ·RT-PCR 鉴定稳定转染 HA-APJ，pcDNA3.1(-)-APJ 的 HEK293 细胞 | 第96-97页 |
| ·Western blot 鉴定稳定转染 APJ,HA-APJ 的 HEK293 细胞 | 第97-98页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测 APJ 与β-arrestins 共定位 | 第98-100页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测 APJ 与网格蛋白（clathrin）共定位 | 第100-101页 |
| ·免疫共沉淀检测 APJ 与β-arrestins 的结合 | 第101-105页 |
| ·BRET 在活细胞中实时动态研究 APJ 与β-arrestins 之间的相互作用 | 第105-110页 |
| ·融合蛋白功能检测 | 第105-106页 |
| ·BRET 检测 | 第106-110页 |
| ·ELISA 检测 cAMP | 第110-112页 |
| ·Western blot 检测 ERK1/2 磷酸化 | 第112-117页 |
| ·时间依赖的 ERK1/磷酸化激活 | 第112-115页 |
| ·浓度依赖的 ERK1/2 磷酸化激活 | 第115-117页 |
| ·SRE 和 CRE 检测 | 第117-121页 |
| ·SRE 的检测结果 | 第118-119页 |
| ·CRE 活性检测结果 | 第119-121页 |
| 4 讨论 | 第121-131页 |
| ·APJ 与β-arrestins 之间的相互作用 | 第121-124页 |
| ·APJ 的 C-端与功能的关系 | 第124-130页 |
| ·进一步研究计划 | 第130-131页 |
| 5 结论 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第147页 |
