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桃花芽休眠解除SSH文库构建及相关基因的功能分析

符号缩写及中英文对照第1-10页
中文摘要第10-12页
Abstract第12-14页
1 引言第14-42页
   ·植物芽休眠调控机理的研究进展第14-32页
     ·芽休眠概述第14-15页
     ·芽休眠的发展进程第15-17页
     ·休眠发展进程的界定第17-18页
     ·芽休眠的诱导第18-21页
     ·芽休眠的解除第21-23页
     ·休眠及解除期间芽的某些重要生理生化变化第23-25页
     ·休眠及休眠解除期间芽的分子调控机制第25-32页
   ·差异表达基因的筛选方法第32-35页
     ·mRNA 差异显示技术第32-33页
     ·RNA 随机引物聚合酶链式反应第33页
     ·代表性差示分析第33-34页
     ·基因表达的序列分析第34页
     ·抑制差减杂交第34-35页
     ·基因芯片技术第35页
   ·本研究采用的抑制性差减杂交(SSH)第35-40页
     ·SSH 技术流程第35-38页
     ·抑制性差减杂交技术在分离植物差异表达基因中的作用第38-40页
   ·研究目的与意义第40-41页
   ·本项研究的技术路线第41-42页
2 实验材料与方法第42-59页
   ·实验材料第42-43页
     ·实验材料与处理第42页
     ·花芽处理第42-43页
     ·质粒及菌种第43页
     ·试剂盒、生化试剂等第43页
     ·仪器与设备第43页
     ·PCR 引物合成与测序第43页
   ·实验方法第43-58页
     ·桃树花芽休眠解除相关基因的分离第43-55页
     ·桃树花芽自然休眠解除过程中差异基因的表达模式分析第55-56页
     ·防御蛋白及脱水蛋白基因在休眠解除过程中的功能分析第56页
     ·水孔蛋白基因在休眠及休眠解除过程中的功能分析第56-57页
     ·休眠及休眠解除期间过氧化氢相关酶基因的表达分析及 GA、6-BA 对休眠解除的影响第57-58页
   ·数据处理第58-59页
3 结果与分析第59-86页
   ·桃树花芽休眠解除相关基因的分离第59-64页
     ·桃树花芽自然休眠时期的确定第59页
     ·CTAB 法提取的总 RNA 完整性、纯度检测第59-60页
     ·桃花芽 cDNA 差减文库构建及上调表达的 cDNA 阳性克隆的筛选第60-62页
     ·桃树花芽内休眠解除相关基因的 Blast 分析及功能分类第62-64页
   ·桃树花芽自然休眠解除过程中差异基因的表达模式分析第64-67页
     ·不同时期桃树花芽总 RNA 的提取第64-65页
     ·花芽自然休眠解除过程中差异基因表达模式的 RT-PCR 分析第65-67页
   ·防御蛋白及脱水蛋白基因在休眠解除过程中的功能分析第67-79页
     ·防御蛋白基因的生物信息学分析第67-72页
     ·脱水蛋白基因的生物信息学分析第72-78页
     ·休眠及休眠解除期曙光油桃花芽 dfn、dhn 基因的转录分析第78页
     ·不同处理条件下防御蛋白、脱水蛋白基因的 RT-PCR 分析第78-79页
   ·水孔蛋白基因在休眠解除过程中的功能分析第79-82页
     ·休眠解除期间水孔蛋白基因的表达分析第79-80页
     ·桃花芽可溶性糖含量的变化第80页
     ·桃花芽含水量的变化第80-81页
     ·曙光油桃可溶性蛋白和脯氨酸含量的变化第81页
     ·低温条件下曙光油桃花芽 AQPs 基因的转录分析第81-82页
   ·休眠解除期间过氧化氢相关酶基因的表达分析第82-86页
     ·休眠解除期间过氧化氢含量的测定第82页
     ·休眠及休眠解除期间 SOD、CAT、POD 的表达分析第82-83页
     ·GA_3、6-BA 对过氧化氢含量的影响第83-84页
     ·GA_3、6-BA 处理条件下 CAT、POD、SOD 的表达分析第84-85页
     ·GA_3、6-BA 处理对休眠解除的影响第85-86页
4. 讨论第86-95页
   ·桃树花芽休眠解除相关基因的分离第86-87页
     ·桃树花芽总 RNA 的提取第86页
     ·差减 cDNA 文库的筛选及差异基因冗余性第86-87页
     ·休眠解除相关基因涉及生命活动的多个方面第87页
     ·低温诱导的核糖体蛋白的表达可能与花芽内休眠的解除有关第87页
   ·桃树花芽自然休眠解除过程中差异基因的表达模式分析第87-90页
     ·HisH3、Dhn 和 MT 基因的表达模式分析第87-88页
     ·PpPod,PpSenescence-associated protein,PpATP-binding cassette transporter protein 基因的表达模式第88-89页
     ·生长素结合蛋白基因 PpABP20、PpCyp450 的表达模式第89-90页
   ·防御素蛋白与脱水蛋白基因在休眠解除过程中的功能分析第90-92页
     ·生物信息学技术在基因功能研究中的应用第90页
     ·不同条件下防御素蛋白基因与脱水蛋白基因在休眠解除过程中的表达分析第90-92页
   ·水孔蛋白基因在休眠解除过程中的功能分析第92-93页
     ·休眠解除期间桃花芽中渗透调节物质的变化第92页
     ·休眠解除期间桃花芽中 AQPs 基因的变化第92-93页
   ·休眠解除期间过氧化氢相关酶基因的表达分析第93-95页
     ·GA_3、6-BA 打破油桃休眠的效应第93-94页
     ·GA_3、6-BA 解除曙光油桃花芽休眠的生理机制探讨第94-95页
5 结论及研究展望第95-98页
   ·结论第95-96页
   ·研究展望第96-98页
参考文献第98-116页
附录第116-118页
致谢第118-119页
攻读博士学位期间发表和已接受论文第119页

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