| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-41页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶的基本性质 | 第15-16页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶的研究进展 | 第16-19页 |
| ·糖蛋白的研究概况 | 第19-24页 |
| ·N-糖基化研究概况 | 第24-25页 |
| ·与糖基化有关的糖生物学数据库及糖基化相关的预测软件 | 第25-27页 |
| ·N-糖基化的功能研究 | 第27-32页 |
| ·生物体 N-糖基化的研究进展 | 第32-35页 |
| ·糖基化修饰的研究方法 | 第35-40页 |
| 实验目的及意义 | 第40-41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-67页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·酶、生化试剂、试剂盒 | 第41页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-67页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶 Pcipg5 基因的体外表达、功能分析 | 第43-58页 |
| ·Pooling-PCR 法分离克隆基因 | 第43-45页 |
| ·基因表达与蛋白纯化 | 第45-51页 |
| ·Pcipg5 基因在辣椒疫病病叶内翻译表达水平的 Western Blot 检测 | 第51-52页 |
| ·Pcipg5 基因活性位点突变及酵母表达纯化 | 第52-54页 |
| ·PCIPG5 纯化蛋白及活性位点突变蛋白酶活测定 | 第54页 |
| ·Pcipg5 基因于辣椒疫病叶内转录表达水平的 RT-PCR 和 Northern Blot 检测 | 第54-57页 |
| ·Pcipg5 基因表达纯化蛋白对辣椒叶片的破坏作用和细胞壁降解 | 第57-58页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶在寄主体内的表达及瞬时表达 | 第58-65页 |
| ·辣椒病叶 cDNA 第一链的合成 | 第58-59页 |
| ·荧光定量 PCR 检测各基因在辣椒疫霉菌侵染寄主时的表达 | 第59-60页 |
| ·糖基化位点定点突变 | 第60-63页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达 | 第63-65页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶糖基化活性研究 | 第65-67页 |
| ·糖基化位点定点突变 | 第65页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达 | 第65页 |
| ·基因表达与蛋白纯化 | 第65-66页 |
| ·纯化的野生蛋白及活性位点突变蛋白酶活测定 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-121页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶 Pcipg5 基因的体外表达 | 第67-78页 |
| ·Pcipg5 基因克隆及序列分析 | 第67-68页 |
| ·基因表达与蛋白纯化 | 第68-72页 |
| ·Pcipg5 基因成熟肽序列分离 | 第69页 |
| ·Pcipg5 基因毕赤酵母表达 | 第69-72页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶 Pcipg5 融合蛋白纯化 | 第72页 |
| ·Pcipg5 基因在辣椒疫病病叶内翻译表达水平的 Western Blot 检测 | 第72-73页 |
| ·Pcipg5 基因活性位点突变及酵母表达纯化 | 第73-74页 |
| ·Pcipg5 基因活性位点突变 | 第73页 |
| ·Pcipg5 活性位点突变基因酵母表达纯化 | 第73-74页 |
| ·PCIPG5 纯化蛋白及活性位点突变蛋白酶活测定 | 第74-75页 |
| ·Pcipg5 基因于辣椒疫病叶内转录表达水平的 RT-PCR 和 Northern Blot 检测 | 第75-77页 |
| ·Pcipg5 基因于辣椒疫病叶内转录表达水平的 RT-PCR 检测 | 第75-76页 |
| ·Pcipg5 基因于辣椒疫病叶内转录表达水平的 Northern Blot 检测 | 第76-77页 |
| ·Pcipg5 基因表达纯化蛋白对辣椒叶片的破坏作用和细胞壁降解 | 第77-78页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶在寄主体内的表达及瞬时表达 | 第78-104页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶序列、结构、进化分析 | 第79-93页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶基因信息、序列及结构分析 | 第79-90页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶 17 个全长基因氨基酸序列比对 | 第90-91页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶基因的进化分析 | 第91-93页 |
| ·荧光定量 PCR 检测各基因在辣椒疫霉菌侵染寄主时的表达 | 第93-99页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达 | 第99-104页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达载体构建 | 第99-100页 |
| ·农杆菌介导的 9 个基因瞬时表达 | 第100-102页 |
| ·农杆菌介导的糖基化突变基因瞬时表达 | 第102-104页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶糖基化活性研究 | 第104-121页 |
| ·农杆菌介导的原基因与糖基化突变基因瞬时表达 | 第104-108页 |
| ·农杆菌介导的 Pcipg5 基因和糖基化突变基因瞬时表达 | 第104-105页 |
| ·农杆菌介导的 Pcipg2 基因和糖基化突变基因瞬时表达 | 第105-106页 |
| ·农杆菌介导的 Pcipg21 基因和糖基化突变基因瞬时表达 | 第106-108页 |
| ·基因表达与蛋白纯化 | 第108-111页 |
| ·Pcipg5 及糖基化突变基因表达与蛋白纯化 | 第108-109页 |
| ·Pcipg2 及糖基化突变基因表达与蛋白纯化 | 第109页 |
| ·Pcipg21 及糖基化突变基因表达与蛋白纯化 | 第109-111页 |
| ·纯化的野生蛋白及糖基化位点突变蛋白酶活测定 | 第111-117页 |
| ·纯化的野生蛋白及糖基化位点突变蛋白 pH 稳定性酶活测定 | 第111-114页 |
| ·纯化的野生蛋白及糖基化位点突变蛋白热稳定性酶活测定 | 第114-117页 |
| ·纯化的野生蛋白及糖基化位点突变蛋白接种辣椒叶片分析 | 第117-121页 |
| ·纯化的野生蛋白 PCIPG5 及糖基化位点突变蛋白接种辣椒叶片分析 | 第117页 |
| ·纯化的野生蛋白 PCIPG2 及糖基化位点突变蛋白接种辣椒叶片分析 | 第117-118页 |
| ·纯化的野生蛋白 PCIPG21 及糖基化位点突变蛋白接种辣椒叶片分析 | 第118-121页 |
| 4 讨论 | 第121-127页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶 Pcipg5 基因的体外表达 | 第121-122页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶在寄主体内的表达及瞬时表达 | 第122-123页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶糖基化活性研究 | 第123-127页 |
| 5 结论 | 第127-132页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶 Pcipg5 基因的体外表达 | 第127-128页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶在寄主体内的表达及瞬时表达 | 第128-129页 |
| ·辣椒疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶糖基化活性研究 | 第129-132页 |
| 参考文献 | 第132-148页 |
| 附录 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第150页 |
