| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-20页 |
| 符号说明 | 第20-22页 |
| 第一章 前言 | 第22-40页 |
| ·壳聚糖和壳寡糖 | 第22-25页 |
| ·甲壳素和壳聚糖 | 第22-23页 |
| ·壳寡糖 | 第23-24页 |
| ·壳寡糖的生产 | 第24-25页 |
| ·壳聚糖酶 | 第25-27页 |
| ·壳聚糖酶的发现 | 第25页 |
| ·壳聚糖酶的来源及生理功能 | 第25页 |
| ·壳聚糖酶的分类 | 第25-26页 |
| ·壳聚糖酶的理化性质 | 第26-27页 |
| ·腐皮镰孢菌及其致病性研究 | 第27-30页 |
| ·酿酒酵母及其表达系统 | 第30-31页 |
| ·根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的真菌转化体系 | 第31-35页 |
| ·根瘤农杆菌介导转化法的原理 | 第31-33页 |
| ·根瘤农杆菌介导转化法的优点 | 第33-35页 |
| ·RNA干扰(RNAi)技术 | 第35-38页 |
| ·实验室前期工作 | 第38-39页 |
| ·本论文研究意义及主要内容 | 第39-40页 |
| 第二章 腐皮镰孢菌F.solani 0114壳聚糖酶CSN1的基因克隆、酶学性质分析及其在酿酒酵母工业菌株中的表达 | 第40-58页 |
| ·材料与方法 | 第41-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·微生物学技术 | 第42-43页 |
| ·分子生物学方法 | 第43-47页 |
| ·测定及分析技术 | 第47-48页 |
| ·实验结果与讨论 | 第48-57页 |
| ·F.solani 0114壳聚糖酶基因DNA序列及cDNA序列的克隆 | 第48-49页 |
| ·csn1在大肠杆菌E.coli BL21中的表达 | 第49-51页 |
| ·CSN1最适pH、温度测定 | 第51-52页 |
| ·CSN1的酶促反应动力学参数测定 | 第52页 |
| ·HPLC法对酶解产物的分析 | 第52-53页 |
| ·分泌型表达CSN1酿酒酵母工程菌株的构建 | 第53-55页 |
| ·重组酿酒酵母工程菌的发酵性能测定 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第三章 根瘤农杆菌介导的腐皮镰孢菌转化体系的建立 | 第58-74页 |
| ·材料与方法 | 第58-65页 |
| ·菌株 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·微生物学技术 | 第60-61页 |
| ·分子生物学方法 | 第61-63页 |
| ·根瘤农杆菌介导的腐皮镰孢菌转化 | 第63-64页 |
| ·腐皮镰孢菌的原生质体转化流程 | 第64-65页 |
| ·实验结果和讨论 | 第65-73页 |
| ·腐皮镰孢菌转化子筛选标记的测定 | 第65-66页 |
| ·双元载体pCABAR和pCAHPH的构建 | 第66-69页 |
| ·双元载体pCABAR、pCAHPH转化根瘤农杆菌LBA4404 | 第69页 |
| ·根瘤农杆菌介导的腐皮镰孢菌转化 | 第69-70页 |
| ·根瘤农杆菌介导的腐皮镰孢菌转化子的验证 | 第70-71页 |
| ·腐皮镰孢菌的原生质体转化 | 第71-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第四章 F.solani CSN1超表达菌株和RNA干扰菌株的构建及CSN1的生理功能研究 | 第74-101页 |
| ·材料与方法 | 第75-81页 |
| ·菌株和质粒 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75-76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·微生物学技术 | 第76页 |
| ·分子生物学方法 | 第76-79页 |
| ·根瘤农杆菌介导的腐皮镰孢菌转化流程 | 第79页 |
| ·测定及分析技术 | 第79-81页 |
| ·实验结果与讨论 | 第81-100页 |
| ·荧光定量PCR法引物扩增效率的测定 | 第81-82页 |
| ·F.solani 0114液体培养时CSN1的表达分析 | 第82-84页 |
| ·F.solani 0114侵染豌豆时CSN1的表达分析 | 第84-85页 |
| ·F.solani CSN1超表达菌株的构建 | 第85-90页 |
| ·F.solani CSN1 RNAi菌株的构建 | 第90-95页 |
| ·F.solani CSN1超表达菌株和RNAi菌株的生孢测定 | 第95页 |
| ·F.solani CSN1超表达菌株和RNAi菌株的生长测定 | 第95-96页 |
| ·F.solani CSN1超表达菌株和RNAi菌株的豆荚侵染测试 | 第96-97页 |
| ·F.solani CSN1超表达菌株和RNAi菌株的豆苗侵染测试 | 第97-100页 |
| ·本章小结 | 第100-101页 |
| 全文总结 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间以第一作者发表的学术论文 | 第117-118页 |
| 英文论文 | 第118-149页 |
| Ⅰ:Overexpression of the chitosanase gene in Fusarium solani via Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation | 第118-128页 |
| Ⅱ:Knockdown of chitosanase expression in phytopathogenic fungus Fusarium solani and its effect on pathogenicity | 第128-149页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第149页 |
