| 摘要 | 第1-18页 |
| ABSTRACT | 第18-25页 |
| 第一章:文献综述 | 第25-59页 |
| ·粘细菌及其经典的多细胞群体行为概述 | 第25-38页 |
| ·粘细菌概述 | 第25页 |
| ·粘球菌的经典多细胞行为概述 | 第25-38页 |
| ·双运动系统支配的菌株滑动运动 | 第26-33页 |
| ·S运动系统 | 第26-31页 |
| ·A运动系统 | 第31-33页 |
| ·多细胞子实体发育、抗逆性孢子形成及这一过程中的信号调节 | 第33-37页 |
| ·多细胞子实体的发生及抗逆性粘孢子的转化形成 | 第33-34页 |
| ·多细胞子实体形态及孢子分化中的信号调控 | 第34-37页 |
| ·群体捕食行为 | 第37-38页 |
| ·海洋耐盐橙色粘球菌HW-1特殊的海洋环境适应模式及环境适应分子机制研究进展 | 第38-41页 |
| ·海洋耐盐橙色粘球菌HW-1及其特殊的海洋环境适应模式概述 | 第38-40页 |
| ·HW-1环境适应分子机制研究进展 | 第40-41页 |
| ·双组分系统相关基因的研究进展 | 第41-47页 |
| ·双组分信号传导系统概述 | 第41-42页 |
| ·粘球菌中双组分信号转导系统及相关基因的功能研究进展 | 第42-47页 |
| ·粘球菌的多细胞行为与生态适应 | 第47-49页 |
| ·群体行为与菌株的营养生长适应 | 第47-48页 |
| ·群体运动与生态适应 | 第48页 |
| ·自然生境中借助于群体行为的菌株识别 | 第48-49页 |
| ·粘球菌研究方法概述及其主要进展 | 第49-56页 |
| ·粘球菌经典多细胞群体行为的分析方法概述 | 第49-53页 |
| ·子实体发育及生孢分析方法 | 第49-51页 |
| ·运动能力的分析观察方法 | 第51-52页 |
| ·群体捕食能力的分析 | 第52-53页 |
| ·粘球菌中常用的遗传操作体系及工具及粘球菌中基因表达分析方法概述 | 第53-56页 |
| ·粘球菌研究中常用的遗传操作体系及工具 | 第53-56页 |
| ·粘球菌基因表达分析方法 | 第56页 |
| ·本论文工作开展的思路及研究内容 | 第56-59页 |
| 第二章 :橙色粘球菌HW-1随机突变及分散生长突变株中失活基因的功能分析 | 第59-92页 |
| ·实验材料 | 第59-65页 |
| ·菌株及质粒 | 第59-61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·实验试剂及仪器耗材 | 第61-65页 |
| ·实验方法 | 第65-74页 |
| ·HW-1野生菌株的电转化及突变株的筛选 | 第65-66页 |
| ·不同条件下的HW-1电转化 | 第65-66页 |
| ·突变子的保存及特殊突变表型的突变株的获得 | 第66页 |
| ·耐盐能力显著下降突变株YLH0401的表型分析 | 第66-68页 |
| ·运动能力分析 | 第66页 |
| ·社会性发育能力的分析 | 第66-67页 |
| ·细胞外基质染料结合能力实验 | 第67页 |
| ·细胞聚集实验 | 第67-68页 |
| ·EPS产生能力分析 | 第68页 |
| ·突变株YLH0401中质粒插入次数及位点的判断 | 第68-71页 |
| ·粘细菌基因组DNA的提取 | 第68-69页 |
| ·Southern杂交判断突变子YLH0401中质粒插入次数 | 第69-70页 |
| ·质粒营救分析突变子YLH0401中质粒插入位点 | 第70-71页 |
| ·TAIL PCR | 第71页 |
| ·YLH0401中失活基因hdsp及其表达分析 | 第71-73页 |
| ·失活基因的生物信息学分析 | 第71页 |
| ·RT-PCR分析 | 第71-72页 |
| ·β-半乳糖甘酶活分析 | 第72-73页 |
| ·YLH0401中失活基因hdsp基因存在广泛性分析 | 第73-74页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第73页 |
| ·PCR扩增及测序分析 | 第73页 |
| ·Dot blot分析五株标准菌株中hdsp基因的存在情况 | 第73-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-90页 |
| ·HW-1野生菌株电转化条件的优化 | 第74-75页 |
| ·质粒的纯度及浓度对电转化效率的影响 | 第74页 |
| ·菌株的生长状态及电场强弱对电转化效率的影响 | 第74-75页 |
| ·随机突变株的筛选及突变位点的确认 | 第75-82页 |
| ·质粒营救分析获得的突变株中发生插入失活的基因 | 第75-79页 |
| ·Tail-PCR扩增插入位点旁侧基因序列 | 第79-80页 |
| ·Southern杂交质粒插入次数的确认 | 第80-81页 |
| ·插入失活基因及其旁侧基因的克隆分析 | 第81-82页 |
| ·YLH0401突变株的表型分析 | 第82-85页 |
| ·耐盐能力分析 | 第83页 |
| ·突变株的运动及子实体发育生孢能力分析 | 第83-84页 |
| ·突变株的胞外基质分析 | 第84-85页 |
| ·YLH0401中失活基因hdsp的表达分析 | 第85-88页 |
| ·YLH0401中失活基因hdsp的存在分析 | 第88-90页 |
| ·本章小结 | 第90-92页 |
| 第三章:海水调控表达的双组分系统相关基因的敲除及显著差异表达基因在海水适应中的功能分析 | 第92-130页 |
| ·实验材料 | 第93-96页 |
| ·菌株及质粒 | 第93-95页 |
| ·培养基 | 第95页 |
| ·实验试剂 | 第95页 |
| ·仪器设备及耗材 | 第95-96页 |
| ·实验方法 | 第96-100页 |
| ·目的基因缺失载体的构建流程及示意图 | 第96-98页 |
| ·目的基因缺失载体构建的流程 | 第96-97页 |
| ·目的基因缺失载体构建的流程示意图 | 第97-98页 |
| ·黄色粘球菌DK1622的电转化及突变株的筛选纯化 | 第98页 |
| ·黄色粘球菌DK1622的电转化 | 第98页 |
| ·基因缺失突变株的筛选及纯化 | 第98页 |
| ·具有显著表型变化的突变株YL0401及YL0402的性质分析 | 第98-100页 |
| ·不同盐浓度下生长曲线的变化 | 第98-99页 |
| ·不同盐浓度下子实体发育及生孢能力变化分析 | 第99页 |
| ·死活细胞染色分析菌株在发育阶段的存活 | 第99页 |
| ·不同盐浓度下菌株的菌落扩展能力分析 | 第99-100页 |
| ·突变株在海水和淡水条件下的生长及社会学行为分析 | 第100页 |
| ·实验结果与分析 | 第100-128页 |
| ·海水调控表达基因的基本信息概述 | 第100-102页 |
| ·基因缺失载体的构建及验证 | 第102-107页 |
| ·基因缺失突变株的筛选、纯化及验证 | 第107-111页 |
| ·最显著差异表达的两个基因缺失突变株在海水适应中作用机制分析 | 第111-121页 |
| ·最显著差异表达基因中发生缺失的片段示意 | 第111-112页 |
| ·突变株YL0401及YL0402在不同盐浓度下的生长能力分析 | 第112-114页 |
| ·在不同盐浓度下的菌株的运动能力分析 | 第114-117页 |
| ·不同盐浓度下菌株的子实体发育能力及孢子生成能力分析 | 第117-118页 |
| ·不同盐浓度下发育过程中细胞自溶分析 | 第118-121页 |
| ·其他海水调控表达双组分系统相关基因缺失突变株在海水适应中作用机制分析 | 第121-128页 |
| ·21突变株的耐盐生长能力 | 第121页 |
| ·21突变株在淡海水浓度下子实体发育能力及生孢能力的分析 | 第121-128页 |
| ·本章小结 | 第128-130页 |
| 第四章:海水调控表达的双组分系统相关基因在粘球菌细胞行为调控中的作用分析 | 第130-150页 |
| ·实验材料 | 第130-132页 |
| ·菌株和质粒 | 第130-131页 |
| ·培养基 | 第131-132页 |
| ·实验试剂 | 第132页 |
| ·仪器设备及耗材 | 第132页 |
| ·实验方法 | 第132-134页 |
| ·10株双组分系统相关基因缺失突变株的运动能力分析 | 第132页 |
| ·10株双组分系统相关基因缺失突变株在淡水海水条件下子实体发育能力及生孢能力分析 | 第132页 |
| ·10株应答调控元件缺失的突变株的早期发育能力分析 | 第132页 |
| ·10株应答调控元件缺失的突变株的捕食能力分析 | 第132-133页 |
| ·五个发育相关启动子与LacZ基因融合表达菌株的构建 | 第133-134页 |
| ·实验结果与分析 | 第134-148页 |
| ·21个海水调控显著表达基因的基本信息概述 | 第134-135页 |
| ·尚未研究报道的10个双组分系统相关基因在群体运动行为中的作用分析 | 第135-138页 |
| ·10个双组分系统相关基因在粘球菌群体捕食行为中的作用分析 | 第138-140页 |
| ·尚未研究报道的10个双组分系统相关基因在子实体发育和生孢中的作用分析 | 第140-143页 |
| ·DNA结合的应答调控元件编码基因MXAN103参与发育调控的作用途径分析 | 第143-148页 |
| ·发育相关的启动子的选择 | 第143-144页 |
| ·启动子-lacZ融合表达载体及相关菌株的构建 | 第144-146页 |
| ·突变株YL0409及野生株DK162中启动子的表达分析 | 第146-148页 |
| ·本章小结 | 第148-150页 |
| 第五章:分离自不同环境的粘球菌中的pilA基因的多样性及功能分析 | 第150-171页 |
| ·实验材料 | 第151-153页 |
| ·菌株和质粒 | 第151-152页 |
| ·培养基 | 第152页 |
| ·实验试剂 | 第152页 |
| ·仪器设备及耗材 | 第152-153页 |
| ·实验方法 | 第153-155页 |
| ·不同粘细菌菌株的染色体DNA的提取 | 第153页 |
| ·不同粘细菌菌株中pilA基因的克隆及测序及分析 | 第153页 |
| ·来源于不同粘菌菌株的显著差异的pilA基因回补菌株的构建 | 第153页 |
| ·pilA来源野生菌株的基本性质分析 | 第153-154页 |
| ·不同粘球菌野生菌株来源的pilA基因回补菌株的基本性质分析 | 第154-155页 |
| ·实验结果 | 第155-169页 |
| ·不同粘细菌菌株的pilA基因的扩增及序列多样性分析 | 第155-162页 |
| ·相互之间同源性较低的来源于不同野生菌株的pilA基因回补菌株的构建 | 第162-163页 |
| ·pilA来源野生菌株的基本性质分析 | 第163-166页 |
| ·不同粘球菌野生菌株来源的pilA基因回补菌株的基本性质分析 | 第166-169页 |
| ·本章小结 | 第169-171页 |
| 第六章:粘球菌群体运动器官pili在细胞识别中的作用初探 | 第171-191页 |
| ·实验材料 | 第171-173页 |
| ·菌株和质粒 | 第171-173页 |
| ·培养基 | 第173页 |
| ·实验试剂 | 第173页 |
| ·仪器设备及耗材 | 第173页 |
| ·实验方法 | 第173-174页 |
| ·回补菌株的构建及性质分析 | 第173页 |
| ·回补基因的表达分析 | 第173页 |
| ·营养条件下不同粘球菌间菌落扩展融合观察 | 第173-174页 |
| ·不同粘球菌的混合发育分析 | 第174页 |
| ·实验结果 | 第174-188页 |
| ·自然环境中不同粘球菌间的菌落扩展观察 | 第174-176页 |
| ·回补菌株与pilA来源野生菌株及DK1622的扩展融合分析 | 第176-177页 |
| ·自然环境中不同粘球菌菌株混合发育分析 | 第177-179页 |
| ·包含有121B05和132802来源的pilA回补菌株的构建 | 第179-180页 |
| ·pili在子实体形成过程自我识别中的作用分析 | 第180-188页 |
| ·本章小结 | 第188-191页 |
| 创新性与展望 | 第191-193页 |
| 附录1 论文中涉及的引物 | 第193-200页 |
| 附1.1 显著差异表达基因敲除用引物 | 第193-196页 |
| 附1.2 目的片段扩增用引物 | 第196-198页 |
| 附1.3 Tail-PCR用引物 | 第198-200页 |
| 附录2 论文中的各种PCR体系及参数 | 第200-202页 |
| 附2.1 目的片段扩增的普通PCR体系及参数 | 第200-201页 |
| 附2.2 Tail-PCR体系及参数 | 第201-202页 |
| 附录3 论文中的各种酶切、连接等体系简单说明 | 第202-205页 |
| 附3.1 基因组DNA酶切体系 | 第202页 |
| 附3.2 质粒DNA的酶切体系 | 第202页 |
| 附3.3 片段DNA的酶切体系 | 第202-203页 |
| 附3.4 质粒自营救中的片段自连体系 | 第203页 |
| 附3.5 片段与质粒的连接体系 | 第203页 |
| 附3.6 片段与片段的连接体系 | 第203-204页 |
| 附3.7 载体的去磷酸化反应体系 | 第204页 |
| 附3.8 PCR产物磷酸化 | 第204-205页 |
| 附录4 论文中的质粒说明 | 第205-207页 |
| 参考文献 | 第207-218页 |
| 致谢 | 第218-219页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第219-220页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第220-221页 |
| 发表论文 | 第221-238页 |
