| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-18页 |
| ·白藜芦醇 | 第11-15页 |
| ·生化特性及其在植物中的分布与存在形式 | 第11页 |
| ·生物合成途径 | 第11-12页 |
| ·作为植物雌激素而起到预防癌症的作用 | 第12-13页 |
| ·调节癌症第一、二阶段的酶 | 第13页 |
| ·保护心血管系统 | 第13-14页 |
| ·白藜芦醇与炎症 | 第14-15页 |
| ·白藜芦醇合酶 | 第15-18页 |
| ·白藜芦醇合酶的酶学性质 | 第15页 |
| ·白藜芦醇合酶与查尔酮合酶 | 第15-16页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的诱导表达 | 第16页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的转基因研究 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-27页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-27页 |
| ·基本的实验方法 | 第19页 |
| ·RNA的提取(CTAB法结合酸酚、高盐溶液与Trizol) | 第19页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第19-20页 |
| ·Gene Race法克隆全长基因 | 第20-21页 |
| ·Takara公司的pMD-18T载体亚克隆 | 第21页 |
| ·百泰克公司质粒提取试剂盒 | 第21-22页 |
| ·百泰克公司DNA片段的回收 | 第22页 |
| ·粘末端PCR法进行基因克隆 | 第22-23页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第23页 |
| ·蛋白的提取 | 第23页 |
| ·镍柱纯化目标蛋白 | 第23-24页 |
| ·蛋白浓缩及分子筛纯化 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第24页 |
| ·虎杖基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备: | 第25页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化: | 第25页 |
| ·含目的基因的农杆菌的鉴定 | 第25页 |
| ·根癌农杆菌介导pCAMBIA3301转化烟草 | 第25页 |
| ·Trizol法提取烟草RNA | 第25-26页 |
| ·用Promega的DNase处理所提取的RNA | 第26页 |
| ·白藜芦醇的提取 | 第26页 |
| ·色谱分析 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与分析 | 第27-52页 |
| ·虎杖RS基因全长cDNA的克隆与测序分析 | 第27-34页 |
| ·RT-PCR方法克隆虎杖RS基因同源片断 | 第27-28页 |
| ·克隆虎杖RS基因的3’末端: | 第28-29页 |
| ·Gene Race方法克隆基因5’末端 | 第29页 |
| ·全长序列 | 第29-32页 |
| ·与来自花生、葡萄、蓼科大黄属的RS基因以及查尔酮查尔酮合酶基因进行蛋白序列比对 | 第32-34页 |
| ·虎杖基因组DNA中白藜芦醇合酶基因同源序列的克隆与分析 | 第34-40页 |
| ·扩增起始密码子与终止密码子之间的序列 | 第34-35页 |
| ·从虎杖基因组DNA中克隆到比全长编码区缺失了72bp的序列 | 第35-38页 |
| ·从虎杖基因组DNA中克隆到了含有全长编码区的序列 | 第38-39页 |
| ·从虎杖基因组DNA中克隆到含有两个内含子的序列 | 第39-40页 |
| ·PNRS、PCRS、PCRS11基因的原核表达 | 第40-44页 |
| ·将PNRS、PCRS、PCRS11三个基因克隆到pET22B上 | 第40-43页 |
| ·进行诱导表达、纯化与鉴定 | 第43-44页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的植物表达 | 第44-51页 |
| ·利用T载体pMD-18T进行亚克隆 | 第44-45页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第47-48页 |
| ·PCR法检测转基因烟草植株 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR法检测转基因烟草植株 | 第49-50页 |
| ·HPLC法检测转基因烟草中白藜芦醇的含量 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-53页 |
| ·基因克隆 | 第52页 |
| ·原核表达 | 第52页 |
| ·植物表达 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
