| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| ·PACAP及其衍生多肽(rMBAY)的简介 | 第10-19页 |
| ·垂体腺苷酸环化酶激活多肽的研究概况 | 第10页 |
| ·PACAP的结构和基因组成 | 第10-11页 |
| ·PACAP及其受体 | 第11-13页 |
| ·PACAP与受体的连接及信号传导 | 第13-14页 |
| ·PACAP的生理功能 | 第14-16页 |
| ·对神经内分泌系统的作用 | 第14页 |
| ·对神经系统发育、再生的功能及神经保护作用 | 第14-15页 |
| ·对平滑肌的作用 | 第15页 |
| ·对心血管系统的作用 | 第15页 |
| ·调节体内能量代谢的作用 | 第15-16页 |
| ·PACAP在免疫和抗炎中的作用 | 第16页 |
| ·VPAC2受体及其特异激动剂 | 第16-19页 |
| ·内含肽介导多肽制备的原理及优点 | 第19-22页 |
| ·蛋白内含肽简介 | 第19-21页 |
| ·蛋白内含肽介导蛋白纯化 | 第21-22页 |
| ·本研究意义、目的及主要研究内容 | 第22-25页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| ·研究目的 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 重组多肽RMBAY的设计及工程菌pKYB—RMBAY—ER2566的构建 | 第25-33页 |
| ·前言 | 第25-27页 |
| ·材料与方法 | 第27-30页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·质粒和菌种 | 第27页 |
| ·编码RMBAY基因的构建 | 第27-29页 |
| ·重组表达载体pKYB-RMBAY的构建 | 第29页 |
| ·工程菌构建 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-32页 |
| ·重组表达载体pKYB-RMBAY的鉴定 | 第30-31页 |
| ·工程菌pKYB-RMBAY-ER2566的检测 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章 工程菌pKYB—RMBAY—ER2566的中试发酵及目的多肽纯化 | 第33-44页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料和方法 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·上罐前参数探索条件 | 第33-34页 |
| ·蛋白电泳条件 | 第34页 |
| ·中试发酵,发酵罐(5L)发酵探索 | 第34页 |
| ·蛋白内含肽介导纯化(亲合层析和在柱切割) | 第34-36页 |
| ·结果 | 第36-42页 |
| ·pKYB-RMBAY-ER2566的生长曲线 | 第36-37页 |
| ·诱导时机的选择 | 第37页 |
| ·诱导剂IPTG的用量 | 第37-38页 |
| ·诱导时间的筛选 | 第38-39页 |
| ·碳源的筛选 | 第39-40页 |
| ·中试发酵 | 第40-41页 |
| ·蛋白内含肽介导纯化 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第四章 RMBAY体外稳定性的探索 | 第44-57页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料和方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·不同pH值诱导巯酯定向水解的作用 | 第45页 |
| ·NaHS的诱导巯酯定向水解 | 第45页 |
| ·MESNA诱导多肽巯酯定向水解 | 第45-46页 |
| ·MESNA浓度对RMBAY稳定性的影响 | 第46页 |
| ·透析时间对RMBAY稳定性的影响 | 第46页 |
| ·MESNA与NaHS对RMBAY的稳定性的比较 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-53页 |
| ·不同pH值对稳定性的影响 | 第46-48页 |
| ·NaHS的诱导巯酯定向水解 | 第48-49页 |
| ·MESNA诱导的RMBAY巯酯定向水解 | 第49-50页 |
| ·MESNA浓度对RMBAY稳定性的影响 | 第50-51页 |
| ·透析时间对RMBAY稳定性的影响 | 第51-52页 |
| ·MESNA与NaHS对RMBAY的稳定性的比较 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·多肽巯酯的水解 | 第54-55页 |
| ·巯基乙磺酸钠的诱导水解和保护 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第五章 RMBAY降糖及抗炎生物活性研究 | 第57-69页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·材料与方法 | 第57-60页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·RMBAY的降糖活性研究 | 第57-59页 |
| ·RMBAY的抗炎免疫活性研究 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-65页 |
| ·快速降糖的检测 | 第60-61页 |
| ·糖耐受的检测 | 第61-63页 |
| ·胰岛素水平检测 | 第63-64页 |
| ·皮肤炎症抑制作用的检测 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| ·对降糖活性的讨论 | 第65-67页 |
| ·降糖活性测定方法 | 第65-66页 |
| ·PACAP与胰岛素功能 | 第66-67页 |
| ·被动皮肤过敏反应的讨论 | 第67-68页 |
| ·RMBAY衍生多肽对被动皮肤过敏反应的抑制作用 | 第67-68页 |
| ·PACAP的功能被三个受体分割和限定 | 第68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第六章 结论与展望 | 第69-70页 |
| ·结论 | 第69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 附录 | 第80-96页 |
| 致谢 | 第96页 |