| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·黄瓜花叶病毒及其防治 | 第13-16页 |
| ·黄瓜花叶病毒生物学特点 | 第13页 |
| ·黄瓜花叶病毒的结构和基因组功能 | 第13-15页 |
| ·番茄中黄瓜花叶病毒的防治 | 第15-16页 |
| ·microRNAs 的作用机制及其应用 | 第16-19页 |
| ·microRNAs 发现 | 第16页 |
| ·microRNAs 特点与形成 | 第16-18页 |
| ·microRNAs 功能和作用机制 | 第18-19页 |
| ·人工microRNA 技术及其在植物中的应用 | 第19页 |
| ·植物遗传转化研究进展 | 第19-22页 |
| ·植物遗传转化的方法 | 第20页 |
| ·遗传转化植株的鉴定 | 第20-21页 |
| ·植物遗传转化的应用 | 第21-22页 |
| ·研究目的与内容 | 第22-24页 |
| ·研究目的和意义 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 人工microRNA 载体 | 第24-33页 |
| ·材料和方法 | 第24-29页 |
| ·载体及菌株 | 第24页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第24页 |
| ·人工microRNA 骨架 | 第24-25页 |
| ·人工miRNA~(159)-2a | 第25页 |
| ·amiRNA~(159)-2a 的PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·酶切 | 第26-27页 |
| ·回收 | 第27页 |
| ·连接 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌DH5α热转化感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·热转化 | 第28页 |
| ·质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29页 |
| ·序列测定与分析 | 第29页 |
| ·结果分析 | 第29-32页 |
| ·amiRNA~(159)-2a 的设计合成 | 第29-30页 |
| ·amiRNA~(159)-2a 的PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·pBI121 和amiRNA~(159)-2a 酶切 | 第31-32页 |
| ·重组载体pBI121-amiRNA~(159)-2a 的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·小结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 转amiRNA~(159)-2a 番茄的构建 | 第33-42页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·植物材料和农杆菌 | 第33页 |
| ·载体pBI121-amiRNA~(159)-2a 转化农杆菌EHA105 | 第33-34页 |
| ·用于侵染番茄的农杆菌菌液准备 | 第34页 |
| ·番茄种子消毒及接种 | 第34页 |
| ·外植体转化 | 第34-35页 |
| ·番茄筛选培养中最佳培养条件的确定 | 第35-36页 |
| ·分化出芽激素组合种类及浓度的筛选 | 第35页 |
| ·卡那霉素浓度的筛选 | 第35页 |
| ·脱菌素种类及浓度的筛选 | 第35页 |
| ·生根激素IAA 浓度的筛选 | 第35-36页 |
| ·转amiRNA~(159)-2a 番茄植株继代培养及再生 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·农杆菌EHA105 中的重组质粒鉴定 | 第36页 |
| ·最佳分化出芽激素组合及浓度的确定 | 第36-37页 |
| ·最佳卡那霉素浓度的确定 | 第37-38页 |
| ·最佳脱菌素种类及浓度的确定 | 第38-39页 |
| ·最佳生根激素浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·转amiRNA~(159)-2a 番茄苗的获得 | 第40页 |
| ·小结与讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 转amiRNA~(159)-2a 番茄的鉴定 | 第42-55页 |
| ·材料和方法 | 第42-48页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第42页 |
| ·番茄总DNA 提取 | 第42-43页 |
| ·PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·Southern 杂交 | 第44-48页 |
| ·酶切 | 第44-45页 |
| ·标记探针（地高辛） | 第45-46页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第46页 |
| ·变性 | 第46-47页 |
| ·转膜及固定膜 | 第47页 |
| ·预杂交和杂交 | 第47-48页 |
| ·洗膜 | 第48页 |
| ·显色 | 第48页 |
| ·转amiRNA~(159)-2a 番茄接种Fny-CMV | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-53页 |
| ·DNA 的质量 | 第48-49页 |
| ·转amiRNA~(159)-2a 植株的PCR 检测 | 第49-50页 |
| ·转amiRNA~(159)-2a 植株的Southern 检测 | 第50-52页 |
| ·DNA 酶切效果检测 | 第50-51页 |
| ·探针检测 | 第51-52页 |
| ·Southern 杂交结果检测 | 第52页 |
| ·接种 Fny-CMV 的抗病表现 | 第52-53页 |
| ·小结与讨论 | 第53-55页 |
| 总结与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录:重要溶液和培养基的配制 | 第61-62页 |
