| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-25页 |
| ·mi RNA 简介及植物miR159 的研究概况 | 第16-19页 |
| ·植物的抗病毒及相关转基因研究进展 | 第19-22页 |
| ·植物的病毒病以及抗病毒研究 | 第19页 |
| ·植物的转基因研究概况及番茄遗传转化研究进展 | 第19-21页 |
| ·植物抗病毒相关的转基因研究进展 | 第21-22页 |
| ·植物转基因研究的方法 | 第22-23页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第22页 |
| ·DNA 直接导入的基因转化技术 | 第22-23页 |
| ·花粉管通道转基因法 | 第23页 |
| ·miRNA 在植物基因工程上的应用研究进展 | 第23-25页 |
| ·miRNA 与基因沉默 | 第23-24页 |
| ·miRNA 与植物的转基因研究 | 第24-25页 |
| ·研究目的及内容 | 第25页 |
| 第二章 番茄Micro Tom 品种的组培扩繁及抗生素耐受性体系筛选 | 第25-38页 |
| ·材料与实验方法 | 第26-30页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·外植体及种子灭菌 | 第26-27页 |
| ·外植体的筛选及愈伤、不定芽的诱导 | 第27-28页 |
| ·再生植株的生根培养 | 第28页 |
| ·再生植株的炼苗移栽 | 第28页 |
| ·再生植株的抗生素耐受性培养条件筛选 | 第28-29页 |
| ·Micro Tom 组培扩繁及抗生素筛选体系设计 | 第29页 |
| ·数据统计方法 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-37页 |
| ·适合于分化的外植体类型 | 第30-31页 |
| ·诱导愈伤及不定芽的培养基配方 | 第31-32页 |
| ·愈伤及不定芽诱导方式 | 第32-33页 |
| ·诱导生根的培养基配方 | 第33-34页 |
| ·不同高度再生植株的生根情况 | 第34页 |
| ·生根植株的炼苗移栽 | 第34-35页 |
| ·适合本研究的抗生素耐受性植株筛选培养基 | 第35-37页 |
| ·小结与讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 番茄artificial miR159 遗传转化体系的建立 | 第38-54页 |
| ·材料与实验方法 | 第39-45页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-45页 |
| ·CMV-Fny 上靶标序列的筛选 | 第39-40页 |
| ·番茄amiR159 的初步构建 | 第40页 |
| ·载体的选择及引物的设计 | 第40-41页 |
| ·pBI121-amiR159 质粒载体的构建 | 第41-42页 |
| ·对人工改造的质粒载体的双酶切鉴定 | 第42页 |
| ·农杆菌的转化及扩增 | 第42-44页 |
| ·质粒的提取及鉴定 | 第44页 |
| ·植物受体材料的准备 | 第44页 |
| ·农杆菌侵染外植体及其共培养 | 第44-45页 |
| ·再生植株的抗生素选择性筛选 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-53页 |
| ·番茄amiR159 的设计 | 第45-46页 |
| ·番茄amiR159 的二级结构图 | 第46页 |
| ·pBI1121-amiR159 的重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·质粒的双酶切鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·农杆菌转化的鉴定结果 | 第48页 |
| ·农杆菌侵染外植体条件的选择 | 第48-51页 |
| ·外植体预培养处理方法 | 第48-49页 |
| ·农杆菌浓度及菌液处理方法 | 第49-50页 |
| ·农杆菌侵染时间 | 第50页 |
| ·外植体与农杆菌的共培养 | 第50-51页 |
| ·再生植株的抗性表型筛选结果 | 第51-53页 |
| ·小结与讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 番茄遗传转化的分子鉴定及抗病毒功能分析 | 第54-68页 |
| ·材料与实验方法 | 第54-60页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-60页 |
| ·抗性再生植株的分子生物学鉴定 | 第55页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·CTAB 或试剂盒法提取植物基因组DNA | 第55-56页 |
| ·DNA 的PCR 扩增 | 第56页 |
| ·总RNA 的提取 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第57-58页 |
| ·Southern 斑点杂交 | 第58-59页 |
| ·病毒接种 | 第59页 |
| ·阳性植株接毒后生长情况统计 | 第59页 |
| ·病情指数统计 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-66页 |
| ·抗性再生植株的分子鉴定结果 | 第60-63页 |
| ·基因组DNA 提取及目的片段PCR 的结果 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第61页 |
| ·点杂交灵敏度检测结果 | 第61-62页 |
| ·点杂交定性检测结果 | 第62-63页 |
| ·阳性植株的综合抗病效果统计 | 第63-66页 |
| ·植株生长情况 | 第63-65页 |
| ·感病情况及病情指数统计 | 第65-66页 |
| ·小结与讨论 | 第66-68页 |
| 总结 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第82页 |
