产DCase的基因工程菌发酵及酶固定化工艺研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-30页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶 | 第11-15页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶的性质 | 第11-12页 |
| ·DCase的结构特征 | 第12页 |
| ·DCase的催化机制 | 第12-15页 |
| ·D-对羟基苯甘氨酸(D—pHPG) | 第15-20页 |
| ·D-pHPG的性质和作用 | 第15页 |
| ·以D-pHPG为侧链的几种主要药物 | 第15-17页 |
| ·D-pHPG的应用前景 | 第17-18页 |
| ·D-pHPG的制备方法 | 第18-20页 |
| ·海因酶 | 第20-21页 |
| ·海因酶的性质及重要性 | 第20-21页 |
| ·海因酶基因工程菌方面的研究 | 第21页 |
| ·高产酶菌株的获得方法及发酵工艺 | 第21-23页 |
| ·海因酶产生菌的筛选 | 第21-22页 |
| ·DCase产生菌的筛选及发酵 | 第22页 |
| ·两种酶工程菌研究的比较 | 第22-23页 |
| ·酶的固定化 | 第23-26页 |
| ·包埋法(entrapment) | 第24页 |
| ·交联法(cross-linking) | 第24页 |
| ·吸附法(adsorption) | 第24-25页 |
| ·共价结合法(covalent binding) | 第25页 |
| ·固定化方法的比较 | 第25-26页 |
| ·新型的固定化技术 | 第26-28页 |
| ·利用光、辐射等物理技术用于酶的固定化 | 第26页 |
| ·酶的定向固定化方法 | 第26-27页 |
| ·多酶系统的共固定化 | 第27-28页 |
| ·本论文的工作目的、意义和研究内容 | 第28-30页 |
| ·目的和意义 | 第28页 |
| ·论文工作内容及工艺流程 | 第28-30页 |
| 2 N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸的制备 | 第30-39页 |
| ·材料与方法 | 第30-31页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| ·主要实验试剂 | 第30页 |
| ·菌种 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·相关溶液 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·生物量的测定 | 第31页 |
| ·斜面培养方法 | 第31页 |
| ·种子摇瓶培养方法 | 第31-32页 |
| ·发酵摇瓶培养方法 | 第32页 |
| ·HPLC分析条件 | 第32页 |
| ·酶活测定 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-38页 |
| ·菌种的纯化 | 第33页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第33页 |
| ·产双酶菌种的验证 | 第33-34页 |
| ·pH值对双酶活力的影响 | 第34-35页 |
| ·菌体与底物的适当配比 | 第35-36页 |
| ·NC-D-pHPG(中间体)的提取 | 第36-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 3 产DCase基因工程菌的发酵条件优化 | 第39-48页 |
| ·材料与方法 | 第39-40页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·主要实验试剂 | 第39页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·相关溶液 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40页 |
| ·酶活测定 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-47页 |
| ·基因工程菌(Espf7)的水平验证 | 第40页 |
| ·胞内酶释放的研究 | 第40-41页 |
| ·发酵培养条件的优化 | 第41-44页 |
| ·发酵培养基的正变优化 | 第44-46页 |
| ·工程菌的罐上发酵结果 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 4 DCase的固定化研究 | 第48-58页 |
| ·材料与方法 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·主要实验试剂 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·DCase的提取 | 第48页 |
| ·蛋白质的测定方法 | 第48-49页 |
| ·回收率的测定 | 第49页 |
| ·酶与载体结合的原理 | 第49页 |
| ·TJS载体上DCase的固定化 | 第49页 |
| ·固定化酶转化控制方法 | 第49页 |
| ·D-pHPG旋光测定方法 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-57页 |
| ·细胞破碎的压力、时间确定 | 第50页 |
| ·蛋白质的测定结果 | 第50-51页 |
| ·酶的固定化条件的确定 | 第51-55页 |
| ·固定化酶的转化批次以及同国外载体的比较 | 第55-56页 |
| ·D-pHPG的旋光测量结果 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 5 结论与展望 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献： | 第60-68页 |
| 附录A | 第68-70页 |
| 附录B(攻读学位期间的主要学术成果) | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
