| 前言 | 第1-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1．1 Z．mobilis 概述 | 第10页 |
| 1．2 Z．mobilis 内源质粒研究 | 第10-13页 |
| 1．3 关于ATCC10988 中pZM2 质粒的研究 | 第13-15页 |
| 1．4 Z．mobilis 载体系统的构建与研究 | 第15-18页 |
| 1．5 Z．mobilis CP4 的研究进展 | 第18页 |
| 1．6 课题的研究目的、背景和内容 | 第18-20页 |
| 1．6．1 研究目的 | 第18页 |
| 1．6．2 研究背景 | 第18-19页 |
| 1．6．3 研究内容 | 第19-20页 |
| 1．7 实验流程 | 第20-22页 |
| 1．7．1 实验流程图 | 第20-21页 |
| 1．7．2 穿梭质粒构建示意图 | 第21-22页 |
| 第二章 试验材料和方法 | 第22-38页 |
| 2．1 实验材料和仪器 | 第22-27页 |
| 2．1．1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2．1．2 酶与试剂 | 第23页 |
| 2．1．3 培养基和常用溶液的配制方法 | 第23-26页 |
| 2．1．4 蛋白质含量测定试剂 | 第26页 |
| 2．1．5 转醛醇酶酶活测定试剂 | 第26-27页 |
| 2．1．6 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2．2 实验方法与步骤 | 第27-38页 |
| 2．2．1 菌体培养 | 第27-28页 |
| 2．2．2 质粒的提取 | 第28-31页 |
| 2．2．3 PCR扩增目的基因 | 第31-32页 |
| 2．2．4 酶切反应 | 第32页 |
| 2．2．5 电泳分析与分离 | 第32页 |
| 2．2．6 电泳条带的回收 | 第32-33页 |
| 2．2．7 乙醇沉淀纯化回收DNA片段 | 第33页 |
| 2．2．8 连接反应 | 第33页 |
| 2．2．9 E．coli 一步法感受态细胞制备与转化、阳性转化子筛选 | 第33页 |
| 2．2．10 质粒电穿孔转化Z．mobilis CP4 和转化子的筛选 | 第33-34页 |
| 2．2．11 质粒的稳定性检测 | 第34-35页 |
| 2．2．12 质粒的拷贝数测定 | 第35-36页 |
| 2．2．13 E．coli K-12 talB蛋白质浓度和酶活性检测 | 第36-38页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第38-56页 |
| 3．1 pZB2 的构建 | 第38-39页 |
| 3．1．1 连接与转化 | 第38页 |
| 3．1．2 转化子质粒酶切分析鉴定 | 第38-39页 |
| 3．2 pZB3 的构建 | 第39-43页 |
| 3．2．1 pZB2/NheI+BamHI 双酶酶切片段的制备 | 第40页 |
| 3．2．2 PCR克隆pZM2 的分配区片段 | 第40-42页 |
| 3．2．3 pZB3 的构建 | 第42-43页 |
| 3．3 pZB21 的构建与转化Z．mobilis CP4 | 第43-45页 |
| 3．3．1 连接与转化 | 第43-44页 |
| 3．3．2 转化子质粒提取物的酶切分析鉴定 | 第44-45页 |
| 3．3．3 pZB21 电穿孔法转化CP4 与转化子的筛选与鉴定 | 第45页 |
| 3．4 pZB31 的构建与转化Z．mobilis CP4 | 第45-48页 |
| 3．4．1 连接与转化 | 第46页 |
| 3．4．2 转化子质粒提取物的酶切分析鉴定 | 第46-48页 |
| 3．4．3 pZB31 电穿孔法转化CP4 与转化子的筛选与鉴定 | 第48页 |
| 3．5 pZB21、pZB31 的稳定性和拷贝数初步比较 | 第48-52页 |
| 3．5．1 稳定性比较 | 第48-51页 |
| 3．5．2 拷贝数比较 | 第51-52页 |
| 3．6 E．coli K-12 talB 在Z．mobilis CP4 中的表达 | 第52-56页 |
| 3．6．1 pZB31-talB的构建 | 第52-55页 |
| 3．6．2 酶活测定 | 第55-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 4．1 结论 | 第56页 |
| 4．2 建议 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-73页 |
| 一、pZM2 物理图谱 | 第62-63页 |
| 二、pBR328 物理图谱 | 第63-64页 |
| 三、pZB1 物理图谱 | 第64-65页 |
| 四、pACYC184 物理图谱 | 第65-66页 |
| 五、pZB2 物理图谱 | 第66-67页 |
| 六、pZB21 物理图谱 | 第67-68页 |
| 七、pZB3 物理图谱 | 第68-69页 |
| 八、pZB31 物理图谱 | 第69-70页 |
| 九、pZB1-talB 物理图谱 | 第70-71页 |
| 十、pZB31-talB 物理图谱 | 第71-72页 |
| 十一、测序结果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
