| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-15页 |
| ·植酸与植酸酶 | 第10-11页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第11-12页 |
| ·植酸酶的结构和性质 | 第11-12页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第12页 |
| ·植酸酶的研究状况 | 第12-14页 |
| ·立题背景及本文的研究任务 | 第14-15页 |
| 第二章 Neurospora crassa植酸酶基因克隆和鉴定 | 第15-26页 |
| ·材料和方法 | 第15-19页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·培养基及培养条件 | 第15页 |
| ·植酸酶酶活测定方法 | 第15页 |
| ·测定步骤 | 第15-16页 |
| ·标准曲线 | 第15-16页 |
| ·测定步骤 | 第16页 |
| ·N. crassa 发酵液中植酸酶活性测定 | 第16页 |
| ·pH缓冲液 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·Neurospora crassa 染色体DNA提取方法 | 第17页 |
| ·N. crassa 植酸酶基因的扩增 | 第17页 |
| ·克隆的N. crassa 植酸酶基因的序列测定 | 第17页 |
| ·DNA重组、转化、阳性转化子筛选 | 第17-18页 |
| ·酵母乙酸锂转化方法 | 第18页 |
| ·酿酒酵母中质粒的提取 | 第18页 |
| ·重组酿酒酵母的鉴定 | 第18页 |
| ·酶活测定 | 第18页 |
| ·SDS-PAGE | 第18-19页 |
| ·结果和讨论 | 第19-25页 |
| ·N. crassa 发酵液中植酸酶活性测定 | 第19页 |
| ·N. crassa植酸酶最适pH的粗测 | 第19页 |
| ·Neurospora crassa染色体DNA的提取 | 第19-20页 |
| ·N. crassa 植酸酶基因的扩增和序列测定结果 | 第20-23页 |
| ·重组质粒pYX212-phy的构建 | 第23-25页 |
| ·重组酿酒酵母的构建与重组酶的表达 | 第25页 |
| ·小结 | 第25-26页 |
| 第三章 Neurospora crassa 植酸酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达和重组酶的生化特性 | 第26-37页 |
| ·材料和方法 | 第26-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·培养基及培养条件 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·DNA重组、转化、阳性转化子筛选 | 第27页 |
| ·酵母电转化方法 | 第27页 |
| ·重组巴斯德毕赤酵母的转化及鉴定 | 第27页 |
| ·酶活测定 | 第27页 |
| ·重组毕赤氏酵母的遗传稳定性 | 第27-28页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第28页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第28页 |
| ·重组植酸酶性质的进一步确定 | 第28页 |
| ·酶学分析 | 第28-29页 |
| ·重组酶的最适pH | 第28页 |
| ·重组酶的最适反应温度的测定 | 第28页 |
| ·重组酶对温度的稳定性测定 | 第28页 |
| ·重组酶与商品酶热稳定性的比较 | 第28-29页 |
| ·重组酶pH稳定性的测定 | 第29页 |
| ·重组酶动力学参数Km与Vmax值的测定 | 第29页 |
| ·不同金属离子对重组酶酶活的影响 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·重组质粒pPIC9K-phy的构建 | 第29-31页 |
| ·重组巴斯德毕赤酵母的构建与鉴定 | 第31页 |
| ·重组毕赤氏酵母的诱导表达 | 第31页 |
| ·重组毕赤氏酵母的遗传稳定性 | 第31页 |
| ·重组酶分离纯化后的蛋白质电泳图谱 | 第31-32页 |
| ·以对硝基苯磷酸为底物时重组酶酶活 | 第32页 |
| ·重组酶的生化特性 | 第32-35页 |
| ·重组酶的最适pH | 第32页 |
| ·重组酶的最适反应温度的测定 | 第32-33页 |
| ·重组酶对温度的稳定性 | 第33页 |
| ·重组酶与商品酶热稳定性的比较 | 第33页 |
| ·对重组酶的pH稳定性的测定 | 第33-34页 |
| ·Km与Vmax | 第34页 |
| ·金属离子对重组酶酶活的影响 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 第四章 N. crassa 植酸酶功能区片断Phy’的性质 | 第37-40页 |
| ·材料和方法 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pPIC9K-phy’的构建和重组菌的构建 | 第37页 |
| ·重组菌的培养 | 第37页 |
| ·酶的分离与纯化 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第37页 |
| ·重组酶Phy’的最适pH | 第37页 |
| ·重组酶Phy’的最适反应温度的测定 | 第37页 |
| ·重组酶Phy’对温度的稳定性测定 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-39页 |
| ·重组酶Phy’分离纯化后的蛋白质电泳图谱 | 第38页 |
| ·重组酶Phy’的生化特性 | 第38-39页 |
| ·重组酶Phy’的最适pH | 第38-39页 |
| ·重组酶Phy’的最适反应温度的测定 | 第39页 |
| ·重组酶Phy’对温度的稳定性 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 论文结论 | 第40-41页 |
| 致 谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 硕士研究期间发表的论文 | 第44-47页 |
