| 内容提要 | 第1-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-53页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第11-16页 |
| ·脂肪酶简介 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的结构特征 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的催化机制 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的分类 | 第14-16页 |
| ·假单胞菌脂肪酶的研究进展 | 第16-25页 |
| ·假单胞菌简介 | 第16-17页 |
| ·假单胞菌脂肪酶的分泌机制研究 | 第17-18页 |
| ·假单胞菌脂肪酶基因的克隆及表达 | 第18-21页 |
| ·假单胞菌脂肪酶的生化性质 | 第21-24页 |
| ·有机溶剂稳定性 | 第24-25页 |
| ·脂肪酶聚集行为分析 | 第25-27页 |
| ·脂肪酶聚集的普遍性 | 第25页 |
| ·脂肪酶聚集的原因 | 第25-26页 |
| ·脂肪酶聚集体性质的变化 | 第26-27页 |
| ·全细胞生物催化剂的制备和应用 | 第27-30页 |
| ·全细胞生物催化剂的特点 | 第27-28页 |
| ·提高细胞膜通透性 | 第28-29页 |
| ·全细胞生物催化剂的应用 | 第29-30页 |
| ·脂肪酶催化手性拆分 | 第30-38页 |
| ·手性普遍性和重要性 | 第30-31页 |
| ·手性化合物的拆分策略 | 第31-32页 |
| ·脂肪酶催化的动力学拆分基础 | 第32-35页 |
| ·提高脂肪酶催化立体选择性的方法 | 第35-38页 |
| ·本课题的科学意义、设计思路和创新点 | 第38-41页 |
| ·参考文献 | 第41-53页 |
| 第二章 假单胞荧光菌脂肪酶基因的克隆 | 第53-67页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-59页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-65页 |
| ·数据库中假单胞脂肪酶的分类 | 第59-60页 |
| ·脂肪酶简并引物的设计 | 第60-61页 |
| ·Pseudomonas. fluorescens JCM 5963 的培养 | 第61页 |
| ·Pseudomonas. fluorescens JCM 5963 基因组的提取 | 第61-62页 |
| ·脂肪酶基因的PCR扩增 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的构建 | 第63页 |
| ·重组质粒的转化和及鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| ·参考文献 | 第66-67页 |
| 第三章 蛋白质序列分析和结构预测 | 第67-80页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料和方法 | 第67-69页 |
| ·生物信息学工具和网络资源 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·序列同源性分析 | 第68页 |
| ·同源模建 | 第68-69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-77页 |
| ·蛋白序列的motif搜索 | 第69-70页 |
| ·蛋白序列的一级结构分析 | 第70-72页 |
| ·蛋白序列的二级结构预测 | 第72-73页 |
| ·序列同源性分析及进化关系 | 第73-75页 |
| ·同源模建 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| ·参考文献 | 第78-80页 |
| 第四章 重组 PFL 的优化表达 | 第80-93页 |
| ·引言 | 第80-81页 |
| ·材料与方法 | 第81-85页 |
| ·实验材料 | 第81-83页 |
| ·实验方法 | 第83-85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-91页 |
| ·表达工程菌的筛选和鉴定 | 第85-86页 |
| ·表达载体及宿主菌株的优化 | 第86-88页 |
| ·IPTG诱导条件的优化 | 第88-90页 |
| ·工程菌诱导表达曲线的绘制 | 第90页 |
| ·培养基的优化 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| ·参考文献 | 第92-93页 |
| 第五章 PFL的分离纯化 | 第93-104页 |
| ·引言 | 第93页 |
| ·材料与方法 | 第93-97页 |
| ·实验材料 | 第93-94页 |
| ·实验方法 | 第94-97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-102页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第97-100页 |
| ·酶在粗提液中的聚集现象 | 第97-98页 |
| ·粗酶液的制备 | 第98-99页 |
| ·Ni-NTA亲和层析纯化 | 第99-100页 |
| ·非变性电泳和活力染色 | 第100页 |
| ·凝胶过滤层析测蛋白分子量 | 第100-102页 |
| ·小结 | 第102页 |
| ·参考文献 | 第102-104页 |
| 第六章 重组PFL的基本酶学性质 | 第104-116页 |
| ·引言 | 第104页 |
| ·材料与方法 | 第104-107页 |
| ·实验材料 | 第104-105页 |
| ·实验方法 | 第105-107页 |
| ·结果与讨论 | 第107-114页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第107-108页 |
| ·pH对酶活的影响 | 第108-109页 |
| ·底物对酶的影响 | 第109-110页 |
| ·动力学常数测定 | 第110-111页 |
| ·金属离子对酶的影响 | 第111页 |
| ·胆酸钠盐对酶活的影响 | 第111-112页 |
| ·有机溶剂对酶的影响 | 第112-114页 |
| ·小结 | 第114页 |
| ·参考文献 | 第114-116页 |
| 第七章 重组PFL催化拆分(R, S)-2-[(2-甲基-6-乙基)苯基氨基]丙酸的研究 | 第116-132页 |
| ·引言 | 第116-117页 |
| ·材料和方法 | 第117-121页 |
| ·实验材料 | 第117-118页 |
| ·实验方法 | 第118-121页 |
| ·重组PFL全细胞酶制剂的制备 | 第118页 |
| ·重组PFL粗酶聚集体制剂和纯酶制剂的制备 | 第118-119页 |
| ·酶催化(R, S)-NEMPA-ME的酯水解反应 | 第119页 |
| ·毛细管柱的准备 | 第119页 |
| ·NEMPA 转化率（C）的检测 | 第119-120页 |
| ·NEMPA对映体过量值（eep）的检测 | 第120页 |
| ·立体选择性比率（E）的计算 | 第120-121页 |
| ·结果与讨论 | 第121-128页 |
| ·不同酶制剂形式的比较 | 第121-123页 |
| ·酶加入量对催化拆分反应的影响 | 第123页 |
| ·温度对催化拆分反应的影响 | 第123-125页 |
| ·pH对催化拆分反应的影响 | 第125-126页 |
| ·有机溶剂对酶活性和立体选择性的影响 | 第126-127页 |
| ·CEA-rPFL的重复使用 | 第127-128页 |
| ·小结 | 第128-129页 |
| ·参考文献 | 第129-132页 |
| 第八章 重组PFL催化拆分手性2-辛醇的研究 | 第132-146页 |
| ·引言 | 第132-133页 |
| ·材料和方法 | 第133-135页 |
| ·实验材料 | 第133页 |
| ·实验方法 | 第133-135页 |
| ·酶催化(R, S)-2-辛醇的酯交换反应 | 第133-134页 |
| ·底物转化率的测定 | 第134页 |
| ·3 2-辛醇的光学纯度(ees)的测定 | 第134-135页 |
| ·立体选择性比率(E)的测定 | 第135页 |
| ·结果与讨论 | 第135-143页 |
| ·酶的活性比较和加入量的确定 | 第135-136页 |
| ·重组PFL酶制剂的催化活性和立体选择性比较 | 第136-138页 |
| ·WC-rPFL催化拆分应反应条件的优化 | 第138-141页 |
| ·底物摩尔比 | 第138页 |
| ·温度的影响 | 第138-139页 |
| ·水活度的影响 | 第139-140页 |
| ·有机溶剂的影响 | 第140-141页 |
| ·WC-rPFL催化拆分(R, S)2-辛醇反应进程 | 第141-142页 |
| ·WC-rPFL的重复使用 | 第142-143页 |
| ·小结 | 第143页 |
| ·参考文献 | 第143-146页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及其它成果 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 中文摘要 | 第148-152页 |
| ABSTRACT | 第152-157页 |
