| 提要 | 第1-9页 |
| 第一部分 | 第9-102页 |
| 第1 章 前言 | 第10-35页 |
| ·嗜热菌和嗜热酶 | 第10-21页 |
| ·嗜热酶的结构特征 | 第11-18页 |
| ·嗜热酶的应用 | 第18-21页 |
| ·纤维素酶和纤维素 | 第21-32页 |
| ·纤维素酶的分类和作用方式 | 第22-23页 |
| ·纤维素降解过程及其催化机理 | 第23-24页 |
| ·纤维素酶分子结构 | 第24-29页 |
| ·嗜热纤维素酶的来源及在异源生物中的表达 | 第29-32页 |
| ·嗜热纤维素酶的应用 | 第32页 |
| ·论文立题依据 | 第32-33页 |
| ·论文研究方法 | 第33-34页 |
| ·论文结构安排 | 第34-35页 |
| 第2 章 蛋白质晶体的制备 | 第35-55页 |
| ·嗜热β-1,4-葡聚糖内切酶FnCel5A的生物信息学分析 | 第35-41页 |
| ·嗜热β-1,4-葡聚糖内切酶FnCel5A的一级序列分析 | 第35-37页 |
| ·FnCel5A催化结构域及其N末端截短突变体蛋白质信息 | 第37页 |
| ·FnCel5A的进化关系与同源比对分析 | 第37-40页 |
| ·FnCel5A的同源结构搜索 | 第40-41页 |
| ·FnCel5A及其N末端截短突变体FnCel5AND的克隆、表达和纯化 | 第41-48页 |
| ·FnCel5A和FnCel5AND的克隆 | 第41-42页 |
| ·FnCel5A和FnCel5AND的表达 | 第42页 |
| ·FnCel5A和FnCel5AND的纯化 | 第42-48页 |
| ·FnCel5A及截短突变体FnCel5AND的结晶 | 第48-55页 |
| ·FnCel5A及截短突变体结晶条件的初步筛选 | 第49-50页 |
| ·NHFnCel5A和FnCel5AND结晶条件的优化 | 第50-51页 |
| ·NHFnCel5A硒代甲硫氨酸衍生物晶体的制备 | 第51-52页 |
| ·FnCel5AND与底物纤维二糖的共结晶 | 第52-55页 |
| 第3 章 数据收集与晶体结构解析 | 第55-77页 |
| ·X射线衍射数据收集与数据处理 | 第55-61页 |
| ·NHFnCel5A母体晶体衍射数据的收集与处理 | 第55-57页 |
| ·NHFnCel5A硒代甲硫氨酸衍生物晶体衍射数据的收集与处理 | 第57-60页 |
| ·FnCel5AND:Glucose复合物晶体衍射数据的收集与处理 | 第60-61页 |
| ·单波长反常散射法（SAD）解析NHFnCel5A硒代衍生物的晶体结构 | 第61-73页 |
| ·X射线衍射分析的基本原理和相位问题 | 第61页 |
| ·求解相位问题的方法 | 第61-64页 |
| ·确定并修正硒原子的位置 | 第64-65页 |
| ·初始相位的获得 | 第65-66页 |
| ·相位改善和密度修正 | 第66-67页 |
| ·结构模型的搭建与精修 | 第67-71页 |
| ·最终结构模型的质量评估 | 第71-73页 |
| ·分子置换解析FnCel5A母体和FnCel5AND:Glucose复合物晶体结构 | 第73-77页 |
| ·分子置换法的原理 | 第74页 |
| ·结构模型的建立和相位的求解 | 第74-75页 |
| ·FnCel5A母体和FnCel5AND:Glucose复合物结构模型的精修 | 第75页 |
| ·FnCel5A和FnCel5AND:Glucose复合物最终结构模型的质量评估 | 第75-77页 |
| 第4 章 晶体结构分析与讨论 | 第77-94页 |
| ·嗜热β-1,4-葡聚糖内切酶FnCel5A活性结构域的整体结构 | 第77-85页 |
| ·FnCel5A活性结构域整体结构描述 | 第77-79页 |
| ·FnCel5A与同源结构间的比较 | 第79-83页 |
| ·FnCel5A结构稳定性因素 | 第83-85页 |
| ·FnCel5A的催化活性中心 | 第85-92页 |
| ·FnCel5AND:Glucose复合物的晶体结构 | 第85-87页 |
| ·FnCel5A的活性中心 | 第87-90页 |
| ·活性中心水分子对底物结合及催化反应发生的贡献 | 第90-91页 |
| ·FnCel5A活性中心磷酸根离子的结合 | 第91-92页 |
| ·FnCel5A的催化机理 | 第92-94页 |
| 第5 章 结论与展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 第二部分 | 第102-133页 |
| 第1 章 前言 | 第103-111页 |
| ·引言 | 第103页 |
| ·研究背景 | 第103-111页 |
| ·脯氨酸寡肽酶家族 | 第103-108页 |
| ·酰基肽水解酶研究现状 | 第108-111页 |
| 第2 章 突变体克隆、表达、纯化与晶体制备 | 第111-115页 |
| ·突变体的克隆 | 第111页 |
| ·突变体的表达、纯化 | 第111-113页 |
| ·突变体ApAPH-ΔN21 的结晶 | 第113-115页 |
| 第3 章 数据收集和结构解析 | 第115-118页 |
| ·突变体ApAPH-ΔN21 的数据收集与处理 | 第115页 |
| ·突变体ApAPH-ΔN21 的结构解析和修正 | 第115-116页 |
| ·突变体ApAPH-ΔN21 最终结构模型的质量评价 | 第116-118页 |
| 第4 章 酶的性质测定 | 第118-124页 |
| ·温度对野生型和突变体催化活性的影响 | 第118-119页 |
| ·野生型和突变体酶的热失活动力学研究 | 第119-120页 |
| ·野生型和突变体酶热变性过程的热力学研究 | 第120-121页 |
| ·化学变性剂对稳定性的影响 | 第121-122页 |
| ·突变体柔性分析 | 第122-124页 |
| 第5 章 晶体结构分析与讨论 | 第124-128页 |
| ·嗜热酰基肽水解酶突变体ApAPH-ΔN21 的整体结构 | 第124-125页 |
| ·嗜热酰基肽水解酶N末端对酶热稳定性和活性的影响 | 第125-128页 |
| ·嗜热酰基肽水解酶N末端螺旋对于酶的稳定性有重要作用 | 第125页 |
| ·N末端盐桥对酶的稳定性的影响 | 第125-127页 |
| ·N末端对酶构象柔性和催化活性的影响 | 第127-128页 |
| 第6 章 结论与展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-133页 |
| 附录A | 第133-134页 |
| 附录B | 第134-135页 |
| 创新点 | 第135-136页 |
| 作者简历 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 中文摘要 | 第139-143页 |
| Abstract | 第143-147页 |
