| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 材料与方法 | 第12-46页 |
| 一、材料 | 第12-20页 |
| 1.酵母菌种和大肠杆菌菌种 | 第12页 |
| 2.质粒载体 | 第12-17页 |
| 3.工具酶及分子量标准 | 第17页 |
| 4.试剂盒 | 第17-18页 |
| 5.主要化学试剂、抗体 | 第18页 |
| 6.酵母、细菌培养基 | 第18页 |
| 7.细胞株及细胞培养用品 | 第18-19页 |
| 8.主要仪器和设备 | 第19-20页 |
| 9.软件及数据库 | 第20页 |
| 二、方法 | 第20-46页 |
| (一) 通用实验操作 | 第20-29页 |
| 1.载体的构建 | 第20-25页 |
| 2.PCR介导的定点诱变 | 第25-28页 |
| 3.细胞的培养和转染 | 第28-29页 |
| (二) 应用报告基因系统检测HR基因mORF的转录水平和翻译水平 | 第29-39页 |
| 1.报告基因系统表达载体构建 | 第29-35页 |
| 2.实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)评估野生型及各种突变型U2HR对下游EGFP报告基因转录水平的影响 | 第35-36页 |
| 3.双荧光素酶报告基因检测 | 第36-37页 |
| 4.Western Blot检测蛋白表达水平 | 第37-39页 |
| (三) U1HR和U2HR可翻译性检测 | 第39-41页 |
| 1.U1HRno-stop和U2HRno-stop载体的构建 | 第40页 |
| 2.Western Blot检测U1HR-EGFP和U2HR-EGFP融合蛋白表达 | 第40-41页 |
| (四) 互补实验(complementary test)探讨U2HR多肽对下游荧光素酶报告基因翻译的影响 | 第41页 |
| 1.pcDNA3.1-U2HR载体构建 | 第41页 |
| 2.互补实验 | 第41页 |
| (五) 蛋白-蛋白相互作用检测 | 第41-46页 |
| 1.酵母双杂交验证候选蛋白与U2HR多肽的相互作用 | 第41-44页 |
| 2.哺乳动物体内双杂检测候选蛋白与U2HR多肽的相互作用 | 第44-46页 |
| 实验结果 | 第46-59页 |
| 一、载体构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 二、U1HR和U2HR对下游HR基因mORF表达的影响 | 第47-49页 |
| 1.U1HRm和U2HRm突变体不改变HR基因转录水平 | 第47-48页 |
| 2.U1HRm和U2HRm突变体影响下游HR基因mORF的翻译效率 | 第48-49页 |
| 三、U2HR突变体对下游HR基因mORF表达的影响 | 第49-50页 |
| 1.U2HR突变体不改变HR基因的转录水平 | 第49页 |
| 2.U2HR突变体使下游HR基因mORF翻译效率获得不同程度的增高 | 第49-50页 |
| 四、U2HR调控下游HR基因mORF翻译的分子机制 | 第50-59页 |
| 1.U2HR对HR基因mORF翻译的调控依赖于U2HR编码的氨基酸 | 第51-52页 |
| 2.U1HR和U2HR在生理条件下是可翻译的 | 第52-53页 |
| 3.U2HR顺式调控下游HR基因mORF的翻译 | 第53页 |
| 4.U2HR编码区N端的氨基酸对下游基因翻译效率的调节可能同样重要 | 第53-55页 |
| 5.U2HR终止密码子附近的氨基酸可能不影响核糖体在mRNA上的滑动 | 第55-57页 |
| 6.U2HR多肽在生理条件下可能与其他蛋白发生相互作用 | 第57-59页 |
| ·酵母双杂交检测U2HR多肽与候选蛋白的相互作用 | 第57-58页 |
| ·哺乳动物体内双杂系统检测U2HR多肽与候选蛋白的相互作用 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-69页 |
| 一、毛发的生长周期和生长调控因素 | 第59-60页 |
| 1、毛囊的基本结构 | 第59页 |
| 2、毛发生长周期 | 第59-60页 |
| 3、毛发周期的调控 | 第60页 |
| 二、HR蛋白过表达是导致MUHH的重要原因 | 第60-63页 |
| 1、HR蛋白在毛发周期中的重要性 | 第60-61页 |
| 2、HR蛋白抑制Wise基因和Soggy基因表达而激活Wnt信号通路 | 第61-62页 |
| 3、U2HR突变使HR基因过表达引起MUHH | 第62-63页 |
| 三、U2HR调控HR基因mORF翻译的分子机制 | 第63-68页 |
| 1、HR基因uORFs和mORF的翻译依赖扫描渗漏(leaky scanning)机制和重起始(reinitiation)机制 | 第63-64页 |
| 2、U2HR编码的氨基酸在U2HR调控HR基因mORF翻译中发挥重要作用 | 第64-65页 |
| 3、U2HR顺式调控HR基因mORF翻译 | 第65页 |
| 4、U2HR终止密码子附近的氨基酸可能不影响核糖体在mRNA上的滑动 | 第65-66页 |
| 5、U2HR多肽可能与其他蛋白发生相互作用而调节HR蛋白的水平 | 第66页 |
| 6、HR基因mORF翻译的可能模式 | 第66-67页 |
| 7、对U1HR突变体和U2HR突变体影响HR基因mORF翻译的解释 | 第67-68页 |
| 四、结论与展望 | 第68-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-83页 |
| 英文名词及缩写 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 个人简历 | 第86-87页 |
