| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-37页 |
| ·引言 | 第14-16页 |
| ·研究背景及进展 | 第16-35页 |
| ·生物农药在蝗虫防治中的应用 | 第16-20页 |
| ·海藻糖抗逆境作用研究现状 | 第20-26页 |
| ·海藻糖的生物合成及TPS1 研究现状 | 第26-35页 |
| ·主要研究目标及研究内容 | 第35-36页 |
| ·研究目标 | 第35-36页 |
| ·主要研究内容 | 第36页 |
| ·本研究的创新点 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-62页 |
| ·技术路线 | 第37-38页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要储液及配方 | 第39-41页 |
| ·培养基储液 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·蛋白质实验溶液配制 | 第40-41页 |
| ·核酸实验所用溶液配制 | 第41页 |
| ·测序和引物合成 | 第41页 |
| ·供试菌株培养及分生孢子悬浮液制备 | 第41页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 基因组DNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·绿僵菌CQMA102 TPS1 基因DNA 同源片段的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第42-45页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMa102 TPS1 同源片段的PCR 扩增 | 第42-45页 |
| ·绿僵菌CQMA102 TPS1 基因CDNA 序列的克隆 | 第45-49页 |
| ·绿僵菌CQMa102 mRNA 的提取 | 第45页 |
| ·TPS1 cDNA 片段的获得 | 第45-46页 |
| ·3’RACE 法克隆TPS1 基因3’端cDNA 序列 | 第46-47页 |
| ·5’RACE 方法克隆TPS1 基因5’端cDNA 序列 | 第47-49页 |
| ·TPS1 基因DNA 序列的扩增 | 第49-50页 |
| ·TPS1 杂交分析 | 第50-52页 |
| ·TPS1 基因Southern 杂交 | 第50-51页 |
| ·TPS1 基因Northern 杂交 | 第51-52页 |
| ·毕赤酵母重组表达质粒PPIC9K-TPS1 的构建 | 第52-54页 |
| ·电激法转化巴斯德毕赤酵母菌株KM71 | 第54-56页 |
| ·高表达TPS1 重组毕赤酵母菌株(KM71/PPIC9K-TPS1)的筛选 | 第56-57页 |
| ·蛋白含量测定 | 第57页 |
| ·重组TPS1 蛋白纯化 | 第57-58页 |
| ·SDS-PAGE 和WESTERN BLOT 分析 | 第58-59页 |
| ·重组TPS1 酶活的测定 | 第59-60页 |
| ·重组TPS1 酶学特性分析 | 第60-62页 |
| ·温度对TPS1 酶活的影响 | 第60页 |
| ·pH 对TPS1 酶活的影响 | 第60页 |
| ·磷酸对TPS1 酶活的影响 | 第60页 |
| ·TPS1 的底物特异性 | 第60-61页 |
| ·底物浓度对TPS1 酶活的影响 | 第61-62页 |
| 3 实验结果与分析 | 第62-89页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 基因DNA 片段的克隆 | 第62-65页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 的诱导表达 | 第65-66页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 CDNA 全长的获得及序列分析 | 第66-72页 |
| ·TPS1 cDNA 片段的获得 | 第66页 |
| ·3’RACE | 第66-67页 |
| ·5’RACE | 第67-68页 |
| ·TPS1 cDNA 及推测蛋白序列分析 | 第68-72页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 基因DNA 序列的扩增及序列分析 | 第72-74页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 基因的杂交分析 | 第74-76页 |
| ·TPS1 基因的Southern 杂交分析 | 第74-75页 |
| ·TPS1 基因表达特性分析 | 第75-76页 |
| ·重组TPS1 的酶活测定 | 第76-78页 |
| ·NADH 的标准曲线 | 第77页 |
| ·重组TPS1 酶比活计算公式 | 第77-78页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 在毕赤酵母中的表达 | 第78-82页 |
| ·表达载体pPIC9K-TPS1 的构建 | 第78-80页 |
| ·ELISA 筛选毕赤酵母KM71/ pPIC9K-TPS1 工程菌株 | 第80-81页 |
| ·酶活筛选高表达TPS1 重组毕赤酵母菌株 | 第81-82页 |
| ·毕赤酵母KM71/ pPIC9K-TPS1 工程菌株的分泌表达 | 第82页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMA102 TPS1 重组蛋白的纯化 | 第82-84页 |
| ·重组TPS1 的酶学特性分析 | 第84-89页 |
| ·温度对重组TPS1 活性的影响 | 第84页 |
| ·pH 对重组TPS1 活性的影响 | 第84-85页 |
| ·磷酸对TPS1 酶活的影响 | 第85-86页 |
| ·底物特异性 | 第86页 |
| ·动力学特性 | 第86-89页 |
| 4 讨论及未来工作展望 | 第89-101页 |
| ·绿僵菌CQMA102 TPS1 基因的克隆 | 第89页 |
| ·绿僵菌CQMA102 TPS1 蛋白结构 | 第89-91页 |
| ·TPS1 基因的表达 | 第91-92页 |
| ·绿僵菌CQMA102 TPS1 在P. PASTORIS 中的异源表达 | 第92-94页 |
| ·重组绿僵菌CQMA102 TPS1 蛋白的纯化 | 第94-95页 |
| ·重组绿僵菌CQMA102 TPS1 的酶学特性 | 第95-98页 |
| ·温度对重组TPS1 活性的影响 | 第95-96页 |
| ·pH 对重组TPS1 活性的影响 | 第96页 |
| ·磷酸对重组TPS1 酶活的影响 | 第96-98页 |
| ·重组TPS1 的底物特异性 | 第98页 |
| ·未来研究工作展望 | 第98-101页 |
| 5 主要结论 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-119页 |
| 附录 | 第119页 |
