| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 略缩语表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1 免疫组织与器官 | 第14-16页 |
| ·胸腺 | 第14页 |
| ·脾脏 | 第14-15页 |
| ·粘膜相关淋巴组织 | 第15-16页 |
| 2 免疫球蛋白 | 第16-28页 |
| ·免疫球蛋白分子的基本结构 | 第16-18页 |
| ·免疫球蛋白连接链 | 第18-21页 |
| ·免疫球蛋白分子类型的多样性 | 第21-28页 |
| ·鱼类免疫球蛋白 | 第21-25页 |
| ·两栖纲免疫球蛋白 | 第25-26页 |
| ·鸟类和哺乳动物免疫球蛋白 | 第26-27页 |
| ·爬行动物免疫球蛋白 | 第27-28页 |
| 3 本研究的目的及内容 | 第28-30页 |
| 第二章 中华鳖免疫球蛋白J链基因的克隆与表达 | 第30-59页 |
| 1 前言 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·载体和菌株 | 第32页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·核酸的提取和纯化 | 第33页 |
| ·J链cDNA全长的获得与序列分析 | 第33-37页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
| ·RACE方法扩增中华鳖J链基因cDNA全长 | 第34-36页 |
| ·J链基因cDNA全长序列分析及系统进化树的构建 | 第36-37页 |
| ·中华鳖胚胎和早期发育阶段J链基因转录水平的表达 | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量PCR检测J链基因的诱导表达变化 | 第38-40页 |
| ·诱导处理与样品的获得 | 第38页 |
| ·RNA的提取 | 第38页 |
| ·RNA样品中DNA的处理 | 第38-39页 |
| ·cDNA模板的准备 | 第39页 |
| ·质粒制备与标准曲线 | 第39-40页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第40页 |
| ·中华鳖J链基因的原核表达 | 第40-42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第42页 |
| ·变性条件下纯化目的蛋白 | 第42页 |
| ·兔多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| ·免疫印迹 | 第42-43页 |
| ·组织蛋白的提取 | 第42-43页 |
| ·免疫印迹分析 | 第43页 |
| ·免疫组化检测J链基因蛋白组织细胞内的分布 | 第43-44页 |
| ·中华鳖免疫球蛋白J链抗体的变化规律 | 第44-45页 |
| ·样品处理 | 第44页 |
| ·间接ELISA | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-56页 |
| ·J链cDNA全长及推导的氨基酸序列特征 | 第45-47页 |
| ·J链基因的系统进化分析 | 第47-49页 |
| ·中华鳖早期发育阶段J链基因的表达 | 第49-50页 |
| ·Real-time PCR检测J链基因的诱导表达变化 | 第50-52页 |
| ·中华鳖J链基因的原核表达 | 第52-53页 |
| ·免疫印迹 | 第53-54页 |
| ·免疫组化分析J链在组织细胞中的定位 | 第54-56页 |
| ·中华鳖血清中免疫球蛋白J链的变化规律 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 第三章 中华鳖免疫球蛋白IgM,IgD和IgY重链基因的克隆、表达及其阳性细胞发生 | 第59-111页 |
| 1 前言 | 第59-60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-68页 |
| ·中华鳖Igs重链基因cDNA全长获得与序列分析 | 第60-62页 |
| ·中华鳖早期发育阶段Igs重链基因转录水平的表达 | 第62页 |
| ·实时荧光定量PCR检测Igs重链基因的诱导表达变化 | 第62-63页 |
| ·中华鳖Igs重链基因的原核表达及多抗制备 | 第63-65页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第65页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第65页 |
| ·免疫印迹 | 第65页 |
| ·免疫组化分析Igs在中华鳖组织细胞中的定位 | 第65页 |
| ·间接ELISA检测中华鳖IgM,IgD和IgY的抗体变化 | 第65页 |
| ·细胞悬液制备及流式细胞术检测 | 第65-66页 |
| ·原位杂交检测中华鳖免疫球蛋白阳性细胞的发生与分布 | 第66-68页 |
| ·所需试剂和溶液 | 第66页 |
| ·样品采集与组织固定 | 第66页 |
| ·探针的制备 | 第66-68页 |
| ·预杂交与杂交 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-102页 |
| ·Igs重链cDNA及推导的氨基酸序列特征 | 第68-74页 |
| ·IgM重链cDNA全长及推导的氨基酸序列特征 | 第68-70页 |
| ·IgD重链cDNA全长及推导的氨基酸序列特征 | 第70-72页 |
| ·IgY重链cDNA全长及推导的氨基酸序列特征 | 第72-74页 |
| ·IgM,IgD和IgY的氨基酸序列对比和进化分析 | 第74-81页 |
| ·IgM,IgD和IgY的基因结构分析 | 第81-82页 |
| ·中华鳖早期发育阶段Igs重链基因转录水平的表达 | 第82-84页 |
| ·Real-time PCR检测IgM,IgD和IgY的诱导表达变化 | 第84-86页 |
| ·中华鳖Igs重链基因的原核表达 | 第86-88页 |
| ·Western blotting检测Igs组织蛋白水平的表达 | 第88-89页 |
| ·免疫组化分析Igs在组织细胞中的定位 | 第89-90页 |
| ·间接ELISA检测中华鳖受免后血清中抗体水平变化 | 第90-93页 |
| ·流式细胞术检测Igs阳性细胞 | 第93-96页 |
| ·白细胞的分离与活性检测 | 第93-94页 |
| ·流式细胞术检测 | 第94-96页 |
| ·原位杂交 | 第96-102页 |
| ·探针cDNA片段的扩增 | 第96-97页 |
| ·质粒的鉴定与酶切 | 第97页 |
| ·探针标记效率检测 | 第97-98页 |
| ·脾脏中IgM阳性细胞的发生 | 第98-99页 |
| ·肾脏中IgM阳性细胞的发生 | 第99页 |
| ·肠中IgM阳性细胞的发生 | 第99-100页 |
| ·脾脏、肾脏和肠中IgD阳性细胞的发生 | 第100-101页 |
| ·脾脏、肾脏和肠中IgY阳性细胞的发生 | 第101-102页 |
| 4 讨论 | 第102-111页 |
| 参考文献 | 第111-124页 |
| 附录 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
