| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-21页 |
| ·红霉素类药物简介 | 第13页 |
| ·红霉素生物合成的分子生物学 | 第13-15页 |
| ·红霉素生物合成的一般生化过程 | 第13-14页 |
| ·红霉素合成基因族 | 第14-15页 |
| ·酮内酯类抗生素的组合生物合成 | 第15-17页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第17-18页 |
| ·FQ-PCR技术在基因表达研究中的应用 | 第18页 |
| ·本论文的研究方案和意义 | 第18-21页 |
| ·研究技术方案 | 第18-20页 |
| ·研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 材料和方法 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-26页 |
| ·菌种和实验动物 | 第21页 |
| ·培养基及培养条件 | 第21-22页 |
| ·缓冲液、抽提液、有机混合液、脱色液和染色液 | 第22-24页 |
| ·工具酶和标记物 | 第24-25页 |
| ·试剂、材料和试剂盒 | 第25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·糖多孢红霉菌生长曲线和湿重曲线的测定 | 第26-27页 |
| ·糖多孢红霉菌总RNA的提取和一次纯化 | 第27-28页 |
| ·糖多孢红霉菌总RNA二次纯化 | 第28页 |
| ·糖多孢红霉菌总RNA的甲醛变性凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·糖多孢红霉菌纯化后总RNA鉴定 | 第29页 |
| ·糖多孢红霉菌总DNA的小量提取 | 第29-30页 |
| ·糖多孢红霉菌总RNA的反转录 | 第30页 |
| ·cDNA的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·DNA片段的电泳分离 | 第31页 |
| ·相对实时定量PCR | 第31页 |
| ·生物信息学分析及抗原的设计 | 第31页 |
| ·TE蛋白多克隆抗体的制备 | 第31-32页 |
| ·TE蛋白多克隆抗血清的免疫双扩散和ELISA检测 | 第32页 |
| ·ELISA检测各时期菌蛋白和抗体的反应 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的银染 | 第33页 |
| ·糖多孢红霉菌总蛋白的提取、测定 | 第33-34页 |
| ·糖多孢红霉菌不同时期发酵产物的提取 | 第34页 |
| ·糖多孢红霉菌发酵产物成分的LC-MS分析 | 第34-35页 |
| 第3章 糖多孢红霉菌M PKS-MRNA表达与DOEB关系的研究 | 第35-47页 |
| ·引言 | 第35-36页 |
| ·结果和分析 | 第36-45页 |
| ·糖多孢红霉菌M的生长曲线和湿重曲线分析 | 第36-37页 |
| ·糖多孢红霉菌M各时期总RNA的鉴定 | 第37-40页 |
| ·总RNA完整性的鉴定 | 第37-38页 |
| ·总RNA基因组污染的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·总RNA纯度和浓度检测 | 第39-40页 |
| ·糖多孢红霉菌M总RNA的反转录及相对real-time PCR | 第40-45页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·糖多孢红霉菌M和A226的RT-PCR特异性鉴定 | 第40-41页 |
| ·相对实时荧光定量PCR反应 | 第41-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第4章 糖多孢红霉菌MPKS-TE蛋白表达与DOEB关系的研究 | 第47-54页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·结果和分析 | 第47-53页 |
| ·糖多孢红霉菌TE蛋白的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| ·糖多孢红霉菌TE蛋白多克隆抗体的滴度和特异性鉴定 | 第48-49页 |
| ·糖多孢红霉菌M和A226各时期菌蛋白和抗体的ELISA反应 | 第49-50页 |
| ·糖多孢红霉菌M各时期菌体总蛋白的浓度测定 | 第50-51页 |
| ·糖多孢红霉菌M各时期PKS蛋白SDS-PAGE电泳和染色 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第5章 糖多孢红霉菌DOEB前体合成与DOEB关系的研究 | 第54-63页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·结果和分析 | 第54-61页 |
| ·样品HPLC洗脱条件和质谱条件的确定 | 第54-55页 |
| ·红霉素前体模块1-模块5产物的检测 | 第55-56页 |
| ·A226菌株模块6产物及糖基化后修饰产物的检测 | 第56-58页 |
| ·M菌株模块6产物及糖基化后修饰产物的检测 | 第58-59页 |
| ·M菌株DOEB产量与A226菌株EB产量比较 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第6章 总结 | 第63-64页 |
| ·本研究主要获得的结果 | 第63页 |
| ·本论文的创新之处 | 第63页 |
| ·需进一步解决的问题 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 硕士期间发表论文目录 | 第73页 |
