| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| ·蛭弧菌简介：发现，形态，分类 | 第11-12页 |
| ·蛭弧菌分离纯化 | 第12页 |
| ·应用现状和前景 | 第12-13页 |
| ·预防水生动物细菌性疾病 | 第12-13页 |
| ·作为饵料添加剂的应用 | 第13页 |
| ·在水质调控中的应用 | 第13页 |
| ·蛭弧菌的分子生物学研究进展 | 第13-15页 |
| ·本研究的立题依据 | 第15-19页 |
| 第二章 蛭弧菌基因组 DNA 制备 | 第19-27页 |
| ·引言 | 第19页 |
| ·材料，溶液和仪器 | 第19-21页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·仪器 | 第19-20页 |
| ·溶液和培养基 | 第20-21页 |
| ·试验方法 | 第21-23页 |
| ·菌体制备 | 第21-22页 |
| ·基因组DNA 制备 | 第22-23页 |
| ·结果与讨论 | 第23-26页 |
| ·BD 存活检测 | 第23-24页 |
| ·宿主残留检测 | 第24页 |
| ·反复冻融法提取基因组DNA | 第24-25页 |
| ·试剂盒提取基因组DNA | 第25页 |
| ·修正化学法和快速灭菌法 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 蛭弧菌16s rRNA 基因的扩增 | 第27-31页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料，试剂和仪器 | 第27页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-29页 |
| ·PCR 模板处理 | 第27-28页 |
| ·引物特异性分析 | 第28页 |
| ·PCR 反应体系 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-30页 |
| ·引物特异性分析 | 第29页 |
| ·扩增结果 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第四章 蛭弧菌16s-ITS 基因的扩增 | 第31-36页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料，药品和仪器 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-33页 |
| ·引物特异性分析 | 第32页 |
| ·退火温度优化 | 第32页 |
| ·Mg~(2+)优化 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增BD 基因 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·引物特异性分析 | 第33页 |
| ·退火温度优化 | 第33页 |
| ·Mg~(2+)优化 | 第33-35页 |
| ·PCR 扩增BD 16s-ITS 基因 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第五章 克隆制备和检测 | 第36-50页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·材料和仪器 | 第37-39页 |
| ·菌种 | 第37页 |
| ·培养基和试剂 | 第37-39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·PCR 产物的切胶纯化和定量 | 第39-40页 |
| ·感受态DH5α制备 | 第40页 |
| ·连接反应 | 第40-41页 |
| ·转化感受态大肠杆菌DH5α | 第41页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第41页 |
| ·菌落PCR（20μL 体系） | 第41-42页 |
| ·克隆的酶切检测 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-48页 |
| ·PCR，切胶纯化和定量 | 第43页 |
| ·克隆统计 | 第43-44页 |
| ·菌落PCR 检测白斑 | 第44-45页 |
| ·质粒抽提和定量 | 第45-46页 |
| ·酶切分析 | 第46-48页 |
| ·双酶切电泳结果 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 测序，进化分析和菌种鉴定 | 第50-65页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·PCR 产物直接测序引物的选定 | 第50-51页 |
| ·测序克隆测序 | 第51页 |
| ·提交序列 | 第51页 |
| ·进化分析和菌株鉴定 | 第51页 |
| ·16s-ITS 序列提交 | 第51页 |
| ·16s-ITS 基因的拼接 | 第51-52页 |
| ·序列BLAST，进化树构建 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-62页 |
| ·测序引物验证 | 第52-53页 |
| ·16s rRNA 基因序列 | 第53-55页 |
| ·16s rRNA 基因提交序列 | 第55页 |
| ·基于16s rRNA 基因的进化分析 | 第55-56页 |
| ·16s-ITS 基因提交序列 | 第56-57页 |
| ·全长16s 基因和ITS 基因拼接序列 | 第57-62页 |
| ·基于ITS 的进化分析和菌种鉴定 | 第62页 |
| ·小结 | 第62-65页 |
| 第七章 dHPLC 用于检测蛭弧菌多样性的初步研究 | 第65-76页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·材料，溶液和仪器 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·溶液 | 第66页 |
| ·仪器 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·测试样品的选择 | 第66页 |
| ·电泳条件的确定 | 第66-67页 |
| ·dHPLC | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-75页 |
| ·样品的选择 | 第67-68页 |
| ·样品制备 | 第68-69页 |
| ·dHPLC 结果 | 第69-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 结论与展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |