| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| ·细菌耐药性 | 第14-17页 |
| ·病原菌耐药性状况 | 第14-15页 |
| ·耐药机制 | 第15-16页 |
| ·抗菌药物研发策略 | 第16-17页 |
| ·分选酶研究进展 | 第17-21页 |
| ·金黄色葡萄球菌的表面蛋白 | 第17-18页 |
| ·分选酶 | 第18-20页 |
| ·分选酶种类 | 第20-21页 |
| ·分选酶结构 | 第21页 |
| ·分选酶抑制剂的筛选 | 第21-23页 |
| ·分选酶抑制剂筛选方法 | 第22页 |
| ·抑制剂的筛选 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母表面展示系统 | 第23-27页 |
| ·酵母表面展示系统的类型 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特性 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统的组成及构建 | 第26-27页 |
| ·本课题的研究背景、意义及研究内容 | 第27-30页 |
| ·研究背景和意义 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-29页 |
| ·研究的技术路线 | 第29-30页 |
| 第二章 QALPETGEE-EGFP 基因在T 载体中的克隆 | 第30-42页 |
| ·材料 | 第30-33页 |
| ·菌种与质粒 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·主要设备 | 第31-32页 |
| ·培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第32-33页 |
| ·主要方法 | 第33-36页 |
| ·大肠杆菌中质粒提取 | 第33页 |
| ·琼脂糖电泳鉴定DNA | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·QALPETGEE-EGFP 基因的扩增 | 第34页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第34-35页 |
| ·QALPETGEE-EGFP 基因的TA 克隆 | 第35页 |
| ·转化子的鉴定及酶切片段回收 | 第35-36页 |
| ·对重组质粒测序 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·分选酶底物基因QALPETGEE-EGFP 的扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·分选酶底物QALPETGEE-EGFP 的扩增 | 第40页 |
| ·分选酶底物QALPETGEE-EGFP 在T 载体中的克隆 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 分选酶底物基因 QALPETGEE-EGFP 在 GS115 中的表达 | 第42-57页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·质粒与实验菌株 | 第42页 |
| ·主要生化试剂 | 第42-43页 |
| ·实验设备 | 第43-44页 |
| ·培养基的配制 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-50页 |
| ·从E.coli Top10/pKFS 中提取质粒 | 第44页 |
| ·从E.coli Top10/pMD19-QALPETGEE-eGFP 提取质粒 | 第44页 |
| ·紫外分光光度法定量DNA | 第44-45页 |
| ·限制性酶切 | 第45-46页 |
| ·回收酶切后的片段 | 第46页 |
| ·构建表达载体 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第47页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及酵母转化 | 第47-48页 |
| ·重组毕赤酵母转化子的筛选 | 第48-49页 |
| ·甲醇诱导分选酶A 底物在毕赤酵母中的表达 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·质粒pKFS 及质粒pMD 19-QALPETGEE-EGFP 的提取及酶切 | 第50页 |
| ·重组载体pKFS-QALPETGEE-EGFP 的构建 | 第50-52页 |
| ·重组载体在毕赤酵母中的诱导表达 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·重组载体pKFS-QALPETGEE-EGFP 的构建 | 第54页 |
| ·重组载体在毕赤酵母中的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 第四章 重组分选酶A 的诱导表达优化及活性测定 | 第57-70页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·主要生化试剂 | 第57-58页 |
| ·实验设备 | 第58页 |
| ·常用溶液的配制 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·提取质粒pTRX-srtA | 第59页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第59页 |
| ·重组载体的诱导表达优化 | 第59-60页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第60页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第60-61页 |
| ·分选酶A 活性检测 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-67页 |
| ·质粒pTRX-srtA 的提取及酶切 | 第61-62页 |
| ·重组分选酶A 诱导表达优化 | 第62-65页 |
| ·分选酶A 的活性检测 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·重组分选酶A 的可溶性表达 | 第67页 |
| ·组氨酸标签在SDS-PAGE 检测重组蛋白中的影响 | 第67-68页 |
| ·流式细胞术检测分选酶A 的活性 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
