| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-29页 |
| 1.1 FAM76B研究现状 | 第15-16页 |
| 1.2 PGRN研究现状 | 第16-22页 |
| 1.3 巨噬细胞功能研究现状 | 第22-27页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第27-29页 |
| 第二章 FAM76B在肿瘤耐药性、细胞存活能力及细胞衰老和增殖中的功能研究 | 第29-85页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-35页 |
| 2.1.1 细胞和菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 载体与试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第31-34页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-52页 |
| 2.2.1 针对hFAM76B的sgRNA的设计 | 第35-37页 |
| 2.2.2 针对hFAM76B的sgRNA的筛选 | 第37-41页 |
| 2.2.3 hFAM76B基因敲除的HEK293细胞的克隆化及PCR鉴定 | 第41-43页 |
| 2.2.4 细胞总蛋白收获及WB检测 | 第43-44页 |
| 2.2.5 携带FAM76B及PGRN基因的慢病毒载体的构建 | 第44-46页 |
| 2.2.6 稳定表达FAM76B或PGRN及对照MCF-7细胞系的建立 | 第46页 |
| 2.2.7 雌激素反应元件(Estrogen response element,ERE)调控荧光素酶表达的启动子活性报告载体的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.8 实时定量PCR引物的设计与合成 | 第47页 |
| 2.2.9 RNA提取、反转录及Real time PCR检测 | 第47-49页 |
| 2.2.10 小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)的分离 | 第49页 |
| 2.2.11 衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence β-Galactosidase,SA-β-Gal)活性检测 | 第49-50页 |
| 2.2.12 细胞免疫荧光染色 | 第50-51页 |
| 2.2.13 MTT检测 | 第51页 |
| 2.2.14 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染HEK293细胞及MCF-7细胞 | 第51页 |
| 2.2.15 血清中雌激素去除及无雌激素MCF-7培养基的配制 | 第51-52页 |
| 2.3 结果 | 第52-79页 |
| 2.3.1 针对hFAM76B的sgRNA的设计及筛选 | 第52-57页 |
| 2.3.2 FAM76B基因敲除的HEK293细胞系的建立及鉴定 | 第57-63页 |
| 2.3.3 FAM76B对乳腺癌细胞Tamoxifen耐受性的影响 | 第63-71页 |
| 2.3.4 FAM76B对细胞衰老、增殖的影响 | 第71-74页 |
| 2.3.5 FAM76B对细胞存活能力的影响 | 第74-79页 |
| 2.4 讨论 | 第79-85页 |
| 第三章 FAM76B与PGRN在巨噬细胞介导炎症反应中的功能研究 | 第85-123页 |
| 3.1 实验材料 | 第86-87页 |
| 3.1.1 细胞和菌株 | 第86页 |
| 3.1.2 载体与试剂 | 第86页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第86页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第86-87页 |
| 3.2 实验方法 | 第87-92页 |
| 3.2.1 稳定单表达FAM76B或PGRN和双表达FAM76B与PGRN的U937细胞系及对照U937细胞系的建立 | 第87页 |
| 3.2.2 稳定表达PGRN-Strep Ⅱ和Strep Ⅱ -PGRN的U937细胞系的建立 | 第87-88页 |
| 3.2.3 实时定量PCR引物的设计与合成 | 第88-89页 |
| 3.2.4 U937细胞的诱导分化 | 第89页 |
| 3.2.5 小鼠腹腔巨噬细胞的分离 | 第89-90页 |
| 3.2.6 hPTGS2启动子的克隆及其活性报告载体的构建 | 第90-92页 |
| 3.3 结果 | 第92-115页 |
| 3.3.1 U937诱导分化巨噬细胞模型的建立 | 第92-96页 |
| 3.3.2 FAM76B和PGRN对巨噬细胞相关细胞因子表达水平的影响 | 第96-101页 |
| 3.3.3 FAM76B对hIL6和hPTGS2启动子活性的影响 | 第101-106页 |
| 3.3.4 FAM76B和PGRN对巨噬细胞凋亡的影响 | 第106-107页 |
| 3.3.5 FAM76B与PGRN在经PMA单独或联合LPS/IFNγ处理的U937细胞中的细胞定位 | 第107-110页 |
| 3.3.6 PGRN转位进入细胞核的机制探索 | 第110-115页 |
| 3.4 讨论 | 第115-123页 |
| 第四章 总结 | 第123-127页 |
| 参考文献 | 第127-145页 |
| 致谢 | 第145-147页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第147-149页 |
| 附录 | 第149-152页 |
