| 摘要 | 第3-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 前言 | 第18-27页 |
| 技术路线 | 第27-28页 |
| 第一章 构建合并重度肺动脉高血压和不合并患者血浆中miRNA差异表达谱 | 第28-44页 |
| 一、引言 | 第28-29页 |
| 二、实验材料与方法 | 第29-34页 |
| 1.主要实验试剂与耗材 | 第29页 |
| 2.主要仪器 | 第29-30页 |
| 3.实验对象 | 第30-31页 |
| 4.标本收集与处理 | 第31页 |
| 5.血浆总RNA(含miRNA)提取与纯化 | 第31-32页 |
| 6.RNA样品质检 | 第32-33页 |
| 7.全基因组miRNA芯片杂交 | 第33-34页 |
| 8.实验结果的统计学分析: | 第34页 |
| 三、结果 | 第34-41页 |
| 1.血浆样本的mRNA提取和质量测定 | 第35-36页 |
| 2.miRNA表达谱的构建 | 第36-41页 |
| 四、讨论 | 第41-43页 |
| 五、结论 | 第43-44页 |
| 第二章 合并重度肺动脉高血压和不合并患者血浆中差异表达miRNA与临床指标的相关性分析 | 第44-61页 |
| 一、引言 | 第44-46页 |
| 二、实验材料与方法 | 第46-52页 |
| 1.实验对象 | 第46页 |
| 2.主要实验试剂与耗材 | 第46-47页 |
| 3.主要仪器 | 第47页 |
| 4.引物 | 第47-49页 |
| 5.抽提血浆miRNA | 第49页 |
| 6.茎环法RT-PCR反应扩增miRNA | 第49-50页 |
| 7.实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 8.实验结果的统计学分析 | 第51-52页 |
| 二、结果 | 第52-57页 |
| 1.miRNA表达谱可靠性验证 | 第52-53页 |
| 2.miRNA的差异性表达与临床相关性分析 | 第53-57页 |
| 3.差异miRNA的进一步验证 | 第57页 |
| 四、讨论 | 第57-60页 |
| 五、结论 | 第60-61页 |
| 第三章 miRNA-16通过调控其靶基因参与肺动脉高压的分子机制 | 第61-85页 |
| 一、引言 | 第61-62页 |
| 二、实验材料与方法 | 第62-70页 |
| 1.主要实验试剂与耗材 | 第62-64页 |
| 2.主要仪器 | 第64页 |
| 3.细胞培养 | 第64页 |
| 4.细胞转染 | 第64-65页 |
| 5.细胞总RNA提取 | 第65页 |
| 6.mRNA的实时定量PCR | 第65-67页 |
| 7.miRNAs的靶基因预测 | 第67页 |
| 8.构建载体 | 第67页 |
| 9.荧光素酶活性检测 | 第67-68页 |
| 10.细胞蛋白抽取及定量 | 第68页 |
| 11.Western Blot实验 | 第68-69页 |
| 12.细胞生长曲线实验 | 第69页 |
| 13.细胞划痕实验 | 第69-70页 |
| 14.实验结果的统计学分析 | 第70页 |
| 三、结果 | 第70-79页 |
| 1.miR-16的生物学功能和分子机制 | 第70-73页 |
| 2.RBM6是miR-16的直接靶基因 | 第73-77页 |
| 3.miR-16发挥生物学功能的分子机制 | 第77-79页 |
| 四、讨论 | 第79-84页 |
| 1.先天性心脏病PAH的发病机制 | 第79-80页 |
| 2.miR-16的功能 | 第80-81页 |
| 3.miR-16的靶基因及RBM6 | 第81-83页 |
| 4.miR-16靶向RBM6调控增殖和迁移的分子机制 | 第83-84页 |
| 五、结论 | 第84-85页 |
| 全文总结及研究展望 | 第85-86页 |
| 附录 主要缩略词简表 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 综述: 肺高压中的miRNAs调控 | 第94-113页 |
| 参考文献 | 第104-113页 |
| 成果 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
