| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 西瓜的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.1.1 西瓜的起源与分布 | 第10页 |
| 1.1.2 西瓜的营养与价值 | 第10页 |
| 1.1.3 西瓜的种植现状 | 第10-11页 |
| 1.2 西瓜瓜氨酸的研究现状 | 第11页 |
| 1.3 西瓜瓜氨酸合成中鸟氨酸氨甲酰转移酶的研究现状 | 第11-15页 |
| 1.3.1 鸟氨酸氨甲酰转移酶的分离提纯研究 | 第11-12页 |
| 1.3.2 鸟氨酸氨甲酰转移酶的酶促反应动力学研究 | 第12-14页 |
| 1.3.3 鸟氨酸氨甲酰转移酶的基因结构研究 | 第14页 |
| 1.3.4 鸟氨酸氨甲酰转移酶的分布定位研究 | 第14-15页 |
| 1.4 技术路线 | 第15页 |
| 1.5 目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-29页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 酶与试剂盒 | 第16页 |
| 2.1.3 化学试剂与仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.4 PCR引物设计 | 第16-17页 |
| 2.1.5 常用试剂配制 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-29页 |
| 2.2.1 西瓜OCT的提取及条件优化 | 第17-19页 |
| 2.2.2 西瓜OCT的分离纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.3 西瓜OCT的酶学特性 | 第20-21页 |
| 2.2.4 西瓜叶片总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.5 反转录合成cDNA | 第22页 |
| 2.2.6 PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.7 PCR产物纯化 | 第23页 |
| 2.2.8 重组克隆载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.10 重组pMD18-T-OCT质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.11 开放阅读框的克隆 | 第25页 |
| 2.2.12 原核表达载体构建及鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.13 工程菌的表达 | 第26-27页 |
| 2.2.14 重组pET-30a-OCT蛋白诱导表达条件的优化 | 第27页 |
| 2.2.15 重组pET-30a-OCT包涵体蛋白的纯化及复性 | 第27-28页 |
| 2.2.16 重组pET-30a-OCT蛋白的质谱鉴定 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-48页 |
| 3.1 西瓜OCT的提取及条件优化 | 第29-31页 |
| 3.1.1 不同缓冲液pH值对OCT活力的影响 | 第29页 |
| 3.1.2 不同料液比对OCT活力的影响 | 第29页 |
| 3.1.3 不同提取时间对OCT活力的影响 | 第29-30页 |
| 3.1.4 西瓜OCT提取条件的优化 | 第30-31页 |
| 3.2 西瓜OCT的分离纯化 | 第31-34页 |
| 3.2.1 蛋白标准曲线 | 第31-32页 |
| 3.2.2 热处理 | 第32页 |
| 3.2.3 盐析 | 第32-33页 |
| 3.2.4 透析 | 第33页 |
| 3.2.5 西瓜OCT的分离纯化 | 第33-34页 |
| 3.3 西瓜OCT的酶学特性 | 第34-48页 |
| 3.3.1 酶促反应的最适温度 | 第34页 |
| 3.3.2 酶促反应的最造pH值 | 第34-35页 |
| 3.3.3 酶促反应的K_m与V_(max)值的测定 | 第35-36页 |
| 3.3.4 金属离子及抑制剂对酶活力的影响 | 第36页 |
| 3.3.5 西瓜总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.3.6 PCR扩增 | 第37页 |
| 3.3.7 生物信息学分析 | 第37-42页 |
| 3.3.8 重组表达载体pET-30a-OCT的双酶切鉴定 | 第42页 |
| 3.3.9 重组pET30a-OCT的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.3.10 重组pET-30a-OCT诱导表达条件的优化 | 第43-45页 |
| 3.3.11 重组pET-30a-OCT包涵体蛋白的纯化及复性 | 第45-46页 |
| 3.3.12 重组pET-30a-OCT的质谱鉴定 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 西瓜OCT的提取及条件优化 | 第48页 |
| 4.2 西瓜OCT的分离纯化 | 第48-49页 |
| 4.3 西瓜OCT的酶学特性 | 第49页 |
| 4.4 西瓜OCT蛋白的基因克隆与生物信息学分析 | 第49页 |
| 4.5 重组pET-30a-OCT的诱导表达 | 第49-50页 |
| 4.6 重组pET-30a-OCT诱导表达条件的优化 | 第50页 |
| 4.7 重组pET-30a-OCT包涵体蛋白的纯化及复性 | 第50-51页 |
| 4.8 重组pET-30a-OCT蛋白的质谱鉴定 | 第51-52页 |
| 5 结论与展望 | 第52-53页 |
| 5.1 结论 | 第52页 |
| 5.2 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
