| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| 1.1 磷脂酶D的研究概述 | 第8-13页 |
| 1.1.1 磷脂酶D简介 | 第8页 |
| 1.1.2 磷脂酶D的来源 | 第8-9页 |
| 1.1.3 磷脂酶D的反应机理 | 第9-10页 |
| 1.1.4 磷脂酶D的催化特性 | 第10-12页 |
| 1.1.5 磷脂酶D的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 微生物磷脂酶D的克隆表达研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 磷脂酶D在大肠杆菌中的克隆表达 | 第14页 |
| 1.2.2 磷脂酶D在其它表达系统中的克隆表达 | 第14-15页 |
| 1.3 本课题研究意义及主要研究内容 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第17页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19页 |
| 2.1.5 溶液与缓冲液 | 第19-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.2.2 RNA的提取与纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.5 重组表达载体的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.6 毕赤酵母的遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 重组毕赤酵母的摇瓶发酵 | 第28页 |
| 2.2.8 重组磷脂D酶的分离纯化 | 第28页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE | 第28-29页 |
| 2.2.10 重组磷脂酶D的酶活检测 | 第29页 |
| 2.2.11 重组磷脂酶D酶学性质的分析方法 | 第29-30页 |
| 2.2.12 重组磷脂酶D对不同底物水解活性检测 | 第30-32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-52页 |
| 3.1 磷脂酶D的生物信息学比对和分析 | 第32-35页 |
| 3.1.1 黑曲霉磷脂酶D的序列信息分析与比较 | 第32-33页 |
| 3.1.2 黑曲霉磷脂酶D与其他来源磷脂酶D的亲缘关系分析 | 第33-34页 |
| 3.1.3 黑曲霉磷脂酶D的一级结构特征 | 第34-35页 |
| 3.2 黑曲霉磷脂酶D基因的克隆 | 第35-36页 |
| 3.2.1 黑曲霉总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2.2 磷脂酶D目的基因的扩增 | 第36页 |
| 3.3 磷脂酶D重组菌的构建与表达 | 第36-40页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3.3.2 毕赤酵母重组菌的构建与鉴定 | 第38-40页 |
| 3.4 重组毕赤酵母的磷脂酶D发酵水平 | 第40-41页 |
| 3.5 重组磷脂酶D的分离纯化 | 第41-43页 |
| 3.6 重组磷脂酶D的酶学特征 | 第43-52页 |
| 3.6.1 温度对重组磷脂酶D的影响 | 第43-45页 |
| 3.6.2 pH对重组磷脂酶D的影响 | 第45-47页 |
| 3.6.3 金属离子对重组磷脂酶D酶活的影响 | 第47-49页 |
| 3.6.5 重组磷脂酶D的保存稳定性 | 第49-50页 |
| 3.6.6 重组磷脂酶D对不同底物水解活性分析 | 第50-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 4.1 全文总结 | 第52页 |
| 4.2 论文创新点 | 第52页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第52-53页 |
| 5 展望 | 第53-54页 |
| 6 参考文献 | 第54-61页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第61-62页 |
| 8 致谢 | 第62页 |