| 中文摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 引言 | 第10页 |
| 1.1 Nisin的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 成熟Nisin的分子结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 Nisin的理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Nisin的生物合成与调控 | 第12页 |
| 1.1.4 Nisin的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.5 提高nisin产量的研究 | 第13-14页 |
| 1.2 乳酸菌蛋白水解体系 | 第14-18页 |
| 1.2.1 胞外蛋白酶系统 | 第15页 |
| 1.2.2 转运系统 | 第15-16页 |
| 1.2.3 胞内肽酶 | 第16-18页 |
| 1.2.4 乳酸菌蛋白水解体系的研究进展 | 第18页 |
| 1.3 氮源对乳酸菌的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.1 氮源的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.2 脱脂豆粕对乳酸菌的影响 | 第19页 |
| 1.4 本论文主要的课题意义及研究内容 | 第19-22页 |
| 第2章 异源表达胞外蛋白酶提高菌株蛋白水解功能 | 第22-42页 |
| 引言 | 第22页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要实验药品与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要实验仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基和缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 胞外蛋白酶基因引物设计 | 第26页 |
| 2.2.2 B.subtilis168基因组的提取和目的基因的扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.2.1 基因组的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 引物的验证 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 胞外蛋白酶基因的扩增与回收 | 第28页 |
| 2.2.3 PLEB124质粒及PCR产物和质粒的酶切 | 第28-29页 |
| 2.2.4 大肠杆菌TG1感受态的制备与转化 | 第29-31页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 酶切片段与质粒的连接 | 第30页 |
| 2.2.4.3 大肠杆菌TG1的热击转化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 大肠杆菌转化子的筛选与验证 | 第31-32页 |
| 2.2.6 乳酸乳球菌F44感受态的制备与电转化 | 第32-34页 |
| 2.2.6.1 乳酸乳球菌F44感受态的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.6.2 电转化乳酸乳球菌F44 | 第33-34页 |
| 2.2.7 乳酸乳球菌转化子的筛选与验证 | 第34页 |
| 2.2.8 脱脂豆粕水解液的制备 | 第34页 |
| 2.2.9 表达胞外蛋白酶菌株的发酵实验 | 第34-36页 |
| 2.2.9.1 表达胞外蛋白酶菌株发酵OD600、胞外pH的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.9.2 Nisin效价的检测 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 2.3.1 乳酸乳球菌F44在豆粕发酵培养基中的发酵结果 | 第36-37页 |
| 2.3.2 表达胞外蛋白酶对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第37-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-42页 |
| 第3章 过表达肽酶提高菌株蛋白利用能力 | 第42-52页 |
| 引言 | 第42页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.1 菌种 | 第42页 |
| 3.1.2 实验药品与试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 实验主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 3.1.4 培养基和缓冲液 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 内源肽酶基因的获取和引物设计 | 第43-44页 |
| 3.2.2 L.lactisF44基因组的提取和肽酶基因的扩增 | 第44-45页 |
| 3.2.2.1 基因组的提取 | 第44页 |
| 3.2.2.2 引物的验证 | 第44页 |
| 3.2.2.3 肽酶基因的扩增与回收 | 第44-45页 |
| 3.2.3 质粒提取及PCR产物和质粒的酶切 | 第45页 |
| 3.2.4 大肠杆菌TG1感受态的制备与转化 | 第45页 |
| 3.2.5 大肠杆菌转化子的筛选与验证 | 第45页 |
| 3.2.6 乳酸乳球菌F44感受态的制备与转化 | 第45-46页 |
| 3.2.7 乳酸乳球菌转化子的筛选与验证 | 第46页 |
| 3.2.8 豆粕水解液的制备 | 第46页 |
| 3.2.9 乳酸菌的发酵实验 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-49页 |
| 3.3.1 过表达内源肽酶对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.2 过表达内源肽酶对乳酸乳球菌F44菌体浓度的影响 | 第47页 |
| 3.3.3 过表达内源肽酶对发酵液pH的影响 | 第47-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-52页 |
| 第4章 综合强化菌株蛋白水解体系的功能 | 第52-66页 |
| 引言 | 第52页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第52-53页 |
| 4.1.1 菌种 | 第52页 |
| 4.1.2 实验主要药品与试剂 | 第52-53页 |
| 4.1.3 实验主要仪器设备 | 第53页 |
| 4.1.4 培养基和缓冲液 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 4.2.1 基因组的提取 | 第53页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第53-54页 |
| 4.2.3 引物验证和扩增 | 第54-55页 |
| 4.2.3.1 引物验证 | 第54-55页 |
| 4.2.3.2 PCR扩增 | 第55页 |
| 4.2.4 串联多个基因 | 第55-56页 |
| 4.2.5 大肠杆菌PLEB124质粒的提取以及酶切回收 | 第56-57页 |
| 4.2.6 重组反应体系的建立 | 第57页 |
| 4.2.7 大肠杆菌TG1的制备和热击转化 | 第57页 |
| 4.2.8 大肠杆菌转化子的筛选和验证 | 第57页 |
| 4.2.9 乳酸乳球菌F44感受态制备和目标质粒电转化 | 第57页 |
| 4.2.10 乳酸乳球菌转化子的筛选与验证 | 第57页 |
| 4.2.11 豆粕水解液的制备 | 第57-58页 |
| 4.2.12 工程菌株BAFM的发酵实验 | 第58页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| 4.3.1 工程菌株在豆粕酶解液添加量为25%的培养基中发酵结果 | 第58-60页 |
| 4.3.2 多个基因的串联表达对发酵过程中参数的影响 | 第60-62页 |
| 4.3.3 不同豆粕酶解液添加量对nisin产量和菌体浓度的影响 | 第62-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63-66页 |
| 第5章 结论与展望 | 第66-70页 |
| 5.1 结论 | 第66-67页 |
| 5.2 展望 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
