| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 丝状真菌概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 丝状真菌表达系统 | 第12-13页 |
| 1.1.2 食品级安全黑曲霉宿主的改造策略 | 第13-14页 |
| 1.2 葡萄糖氧化酶概述 | 第14-15页 |
| 1.3 测定葡萄糖氧化酶活力的方法 | 第15-16页 |
| 1.4 葡萄糖氧化酶的性质 | 第16-17页 |
| 1.4.1 底物特异性 | 第16页 |
| 1.4.2 最适pH与pH稳定性 | 第16-17页 |
| 1.4.3 最适温度与热稳定性 | 第17页 |
| 1.5 葡萄糖氧化酶的应用 | 第17-19页 |
| 1.5.1 医疗医药业中的应用 | 第17页 |
| 1.5.2 食品业的应用 | 第17-18页 |
| 1.5.3 酿酒业的应用 | 第18页 |
| 1.5.4 畜牧业的应用 | 第18-19页 |
| 1.6 葡萄糖氧化酶的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.7 研究意义及内容 | 第20-22页 |
| 1.7.1 研究意义 | 第20-21页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 培养基与溶液 | 第23-26页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第26页 |
| 2.1.4 实验设备 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 GOD基因的生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2.2 以SH2和HL1为宿主的GOD表达载体的构建 | 第28-33页 |
| 2.2.3 无孢黑曲霉SH2及HL1的转化 | 第33-34页 |
| 2.2.4 葡萄糖氧化酶高效表达转化子筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.5 葡萄糖氧化酶活测定方法 | 第35页 |
| 2.2.6 蛋白含量的测定方法 | 第35-37页 |
| 2.2.7 最优转化子的发酵研究 | 第37页 |
| 2.2.8 酶学性质研究 | 第37-40页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第40-70页 |
| 3.1 GOD基因的生物学信息分析 | 第40-47页 |
| 3.1.1 黑曲霉CBS513.88中GOD基因的选择 | 第40-41页 |
| 3.1.2 核酸序列和氨基酸序列的同源性分析 | 第41-44页 |
| 3.1.3 疏水性分析 | 第44页 |
| 3.1.4 糖基化位点预测 | 第44-46页 |
| 3.1.5 保守结构域预测 | 第46页 |
| 3.1.6 蛋白质二级结构预测 | 第46-47页 |
| 3.1.7 蛋白质同源建模 | 第47页 |
| 3.2 葡萄糖氧化酶重组表达载体的构建 | 第47-52页 |
| 3.2.1 goxC基因的密码子优化及点突变 | 第47-50页 |
| 3.2.2 PglaA-goxCocpm和PnaII/TPI-goxCocpm表达载体的构建 | 第50页 |
| 3.2.3 表达载体PglaA-goxCocpm转化子的验证及测序 | 第50-51页 |
| 3.2.4 表达载体PnaII/TPI-goxCocpm转化子的验证及测序 | 第51-52页 |
| 3.3 葡萄糖氧化酶基因高效表达株的转化与鉴定 | 第52-57页 |
| 3.3.1 葡萄糖氧化酶基因高效表达株的转化结果 | 第52-53页 |
| 3.3.2 GOD重组表达转化子的显色板鉴定 | 第53-55页 |
| 3.3.3 SH2-goxC菌株GOD重组表达转化子的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.4 以HL1为宿主GOD重组表达转化子的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 3.4 GOD重组表达菌株的发酵及酶活检测 | 第57-63页 |
| 3.4.1 葡萄糖氧化酶标准曲线 | 第57-58页 |
| 3.4.2 以SH2为宿主的重组表达株的酶活测定及SDS-PAGE结果 | 第58-59页 |
| 3.4.3 以HL1为宿主的重组表达株的酶活测定及SDS-PAGE结果 | 第59-61页 |
| 3.4.4 SH2宿主重组葡萄糖氧化酶菌株的发酵 | 第61-63页 |
| 3.5 重组葡萄糖氧化酶的酶学性质研究 | 第63-68页 |
| 3.5.1 葡萄糖氧化酶的蛋白纯化 | 第63-65页 |
| 3.5.2 重组葡萄糖氧化酶糖基化的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.5.3 重组葡萄糖氧化酶的酶学性质研究 | 第66-68页 |
| 3.6 高产重组HL1-goxC发酵条件优化 | 第68-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 展望 | 第71-72页 |
| 本论文创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附表 | 第81页 |
