| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 英汉缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 研究现状 | 第13-18页 |
| 1.1.1 肿瘤代谢及代谢重编程 | 第13-14页 |
| 1.1.2 肿瘤细胞糖酵解代谢 | 第14-15页 |
| 1.1.3葡萄糖转运载体(GLUTs)与GLUT3 | 第15-17页 |
| 1.1.4 阴阳因子Yin Yang 1的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.5 抗癌药物奥沙利铂的研究 | 第18页 |
| 1.2 本文研究目的和内容 | 第18-21页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第18页 |
| 1.2.2 主要研究内容 | 第18-21页 |
| 2 YY1对结肠癌细胞葡萄糖转运载体的影响 | 第21-35页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料与实验试剂 | 第21-23页 |
| 2.2.1 细胞培养材料 | 第21页 |
| 2.2.2 培养细胞试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.3.1 细胞培养常用试剂配制 | 第23页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第23-25页 |
| 2.3.3 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.3.4 质粒转染和筛选实验 | 第26页 |
| 2.3.5 细胞蛋白提取及其定量 | 第26-27页 |
| 2.3.6 蛋白检测 | 第27-28页 |
| 2.3.7 细胞mRNA提取 | 第28-29页 |
| 2.3.8 RNA反转录 | 第29页 |
| 2.3.9 Real-Time PCR | 第29-30页 |
| 2.3.10 数据分析 | 第30页 |
| 2.4 实验结果 | 第30-33页 |
| 2.4.1 shYY1敲减质粒的验证 | 第30-31页 |
| 2.4.2 YY1对葡萄糖转运载体GLUT1-8的表达影响 | 第31-32页 |
| 2.4.3 YY1敲减和过表达对GLUT3 mRNA的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.4 YY1敲减和过表达对GLUT3蛋白的影响 | 第33页 |
| 2.5 小结 | 第33-35页 |
| 3 YY1/GLUT3信号通路对结肠癌细胞葡萄糖转运和细胞增殖的影响 | 第35-45页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验材料与实验试剂 | 第35页 |
| 3.2.1 细胞培养材料 | 第35页 |
| 3.2.2 培养细胞试剂 | 第35页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.3.1 葡萄糖检测 | 第35-36页 |
| 3.3.2 乳酸检测 | 第36页 |
| 3.3.3 MTS检测细胞数 | 第36-37页 |
| 3.3.4 EdU细胞增殖检测 | 第37页 |
| 3.3.5 平板克隆实验 | 第37页 |
| 3.3.6 结晶紫染色 | 第37页 |
| 3.3.7 数据分析 | 第37-38页 |
| 3.4 实验结果 | 第38-44页 |
| 3.4.1 YY1对结肠癌细胞HCT116~(wt)细胞葡萄糖转运吸收的影响 | 第38页 |
| 3.4.2 YY1对结肠癌细胞HCT116~(wt)乳酸产生的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.3 GLUT3在YY1调控HCT116~(wt)细胞葡萄糖转运吸收中的作用 | 第39-41页 |
| 3.4.4 同时YY1敲减和GLUT3过表达对HCT116~(wt)细胞乳酸产生的影响 | 第41页 |
| 3.4.5 YY1敲减同时GLUT3过表达对HCT116~(wt)细胞数目的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.6 YY1敲减同时过表达GLUT3对细胞EdU摄取的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.7 GLUT3过表达对YY1敲减所致肿瘤细胞克隆形成减少的影响 | 第43页 |
| 3.4.8 YY1敲减同时过表达GLUT3后的HCT116细胞数目的变化情况 | 第43-44页 |
| 3.5 小节 | 第44-45页 |
| 4 YY1/GLUT3信号通过p53非依赖途径增加肿瘤细胞糖酵解代谢 | 第45-57页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料与实验试剂 | 第45页 |
| 4.2.1 细胞培养材料 | 第45页 |
| 4.2.2 培养细胞试剂 | 第45页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-46页 |
| 4.3.1 ATP检测 | 第45-46页 |
| 4.3.2 抗癌药物实验 | 第46页 |
| 4.3.3 数据分析 | 第46页 |
| 4.4 实验结果 | 第46-55页 |
| 4.4.1 YY1对HCT116~(p53null)细胞葡萄糖转运吸收和乳酸产生的影响 | 第46-47页 |
| 4.4.2 YY1对HCT116~(p53null)细胞GLUT3mRNA的影响 | 第47-48页 |
| 4.4.3 YY1对HCT116~(p53null)细胞GLUT3蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.4.4 YY1敲减同时GLUT3过表达对HCT116~(p53null)细胞葡萄糖转运吸收和乳酸产生的影响 | 第49-51页 |
| 4.4.5 YY1敲减同时GLUT3过表达对HCT116~(p53null)细胞中ATP的影响 | 第51页 |
| 4.4.6 YY1敲减同时GLUT3过表达对HCT116~(p53null)细胞增殖的影响 | 第51-54页 |
| 4.4.7 奥沙利铂通过YY1/GLUT3信号通路抑制HCT116~(p53null)细胞增殖 | 第54-55页 |
| 4.5 小节 | 第55-57页 |
| 5 YY1直接影响GLUT3的转录活性 | 第57-74页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 实验材料与实验试剂 | 第57-58页 |
| 5.2.1 细胞培养材料 | 第57页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第57-58页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-64页 |
| 5.3.1 GLUT3报告基因检测质粒的构建 | 第58-61页 |
| 5.3.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第61页 |
| 5.3.3 染色质免疫共沉淀实验 | 第61-63页 |
| 5.3.4 点突变质粒构建 | 第63-64页 |
| 5.3.5 数据分析 | 第64页 |
| 5.4 实验结果 | 第64-71页 |
| 5.4.1 YY1对GLUT3启动子活性的影响 | 第64-65页 |
| 5.4.2 YY1直接结合GLUT3启动子区域 | 第65-66页 |
| 5.4.3 YY1对GLUT3启动子不同长度区域的调控影响 | 第66-68页 |
| 5.4.4 YY1可通过直接结合GLUT3启动子调控GLUT3转录活性 | 第68-71页 |
| 5.5 小结 | 第71-74页 |
| 6 YY1/GLUT3信号通路对结肠癌细胞体内成瘤的影响 | 第74-84页 |
| 6.1 引言 | 第74页 |
| 6.2 实验材料和实验试剂 | 第74-75页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第74页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第74-75页 |
| 6.2.3 实验仪器 | 第75页 |
| 6.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 6.3.1 动物实验 | 第75-76页 |
| 6.3.2 H&E染色 | 第76页 |
| 6.3.3 免疫组化染色 | 第76页 |
| 6.3.4 动物实验用pGLUT3-puro抗性质粒的构建 | 第76-77页 |
| 6.3.5 动物实验细胞系的构建 | 第77页 |
| 6.3.6 数据分析 | 第77页 |
| 6.4 实验结果 | 第77-81页 |
| 6.4.1 移植瘤生长情况 | 第77-78页 |
| 6.4.2 移植瘤免疫组化染色 | 第78-79页 |
| 6.4.3 结肠癌患者临床组织样品mRNA和蛋白检测 | 第79-80页 |
| 6.4.4 结肠癌组织中的H&E染色和YY1、GLUT3的IHC检测 | 第80-81页 |
| 6.5 小结 | 第81-84页 |
| 7 总结与展望 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 附录 | 第92页 |
| 作者在攻读学期期间发表的论文 | 第92页 |
