| 中文摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-27页 |
| 1.1 错配修复概述 | 第18-21页 |
| 1.1.1 错配修复系统的组成 | 第18页 |
| 1.1.2 错配修复蛋白的结构与功能 | 第18-19页 |
| 1.1.3 错配修复机制 | 第19-21页 |
| 1.2 错配修复蛋白Mlh3 | 第21-22页 |
| 1.2.1 错配修复蛋白Mlh3的结构 | 第21页 |
| 1.2.2 错配修复蛋白Mlh3的核酸内切酶功能 | 第21-22页 |
| 1.2.3 错配修复蛋白Mlh3在减数分裂中的作用 | 第22页 |
| 1.3 嗜热四膜虫概述 | 第22-25页 |
| 1.3.1 四膜虫的生物学特征 | 第22-24页 |
| 1.3.2 嗜热四膜虫减数分裂及相关蛋白 | 第24页 |
| 1.3.3 嗜热四膜虫错配修复蛋白Mlh3的功能 | 第24-25页 |
| 1.4 本课题研究的意义 | 第25-27页 |
| 第二章 嗜热四膜虫MLH3基因的序列分析及原核表达纯化 | 第27-38页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.2.2 试剂与工具酶 | 第27页 |
| 2.2.3 引物 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第28页 |
| 2.2.5 主要试剂配制 | 第28页 |
| 2.3 方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 MLH3基因的合成及重组质粒pGEX-MLH3的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.2 MLH3的突变及重组质粒构建 | 第29-31页 |
| 2.3.3 GST-Mlh3及其突变体的表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.4 GST-Mlh3及其突变体的Western-blotting检测 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-37页 |
| 2.4.1 Mlh3序列分析及蛋白结构预测 | 第33-34页 |
| 2.4.2 嗜热四膜虫MLH3基因的合成及pGEX-MLH3的构建鉴定 | 第34页 |
| 2.4.3 pGEX-MLH3-D117N、pGEX-MLH3-D117N-E123A和pGEX-MLH3-D117N-E123AΔ28的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.4 Mlh3蛋白及突变体蛋白的表达与纯化及Western-Blotting检测 | 第35-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 错配修复蛋白Mlh3核酸内切酶活性分析 | 第38-47页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 试剂与工具酶 | 第38页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第38页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 | 第38-39页 |
| 3.3 方法 | 第39-41页 |
| 3.3.1 Mlh3蛋白及突变体蛋白的透析换液与浓缩 | 第39页 |
| 3.3.2 BCA法测定Mlh3蛋白及突变体蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 3.3.3 GST-Mlh3核酸内切酶活性检测 | 第40-41页 |
| 3.4 结果 | 第41-45页 |
| 3.4.1 Mlh3具有离子依赖的核酸内切酶活性 | 第41-42页 |
| 3.4.2 ATP可以促进Mlh3的核酸内切酶活性 | 第42-43页 |
| 3.4.3 Mlh3对大片段DNA具有更强的切割作用 | 第43-44页 |
| 3.4.4 关键位点的突变导致Mlh3核酸内切酶活性降低 | 第44-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 错配修复蛋白Mlh3与多种因子共同参与四膜虫减数分裂进程 | 第47-55页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料 | 第47-48页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 4.2.2 试剂与工具酶 | 第47页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第47页 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 | 第47-48页 |
| 4.3 方法 | 第48-51页 |
| 4.3.1 嗜热四膜虫的培养 | 第48页 |
| 4.3.2 HA-Mlh3的免疫共沉淀和质谱分析 | 第48-50页 |
| 4.3.3 pSUMO-DMC1,pSUMO-MND1的构建 | 第50页 |
| 4.3.4 His-SUMO-Dmc1,His-SUMO-Mnd1的表达与纯化 | 第50页 |
| 4.3.5 His-SUMO-Dmc1,His-SUMO-Mnd1的Western-blotting检测 | 第50页 |
| 4.3.6 Mlh3蛋白与Dmc1/Mnd1蛋白的Pull-down分析 | 第50-51页 |
| 4.4 结果 | 第51-53页 |
| 4.4.1 HA-Tag免疫共沉淀鉴定出多种与Mlh3相互作用的因子 | 第51页 |
| 4.4.2 pSUMO-MND1,pSUMO-DMC1的构建及重组蛋白的表达纯化 | 第51-52页 |
| 4.4.3 Mlh3与Mnd1及Dmc1之间的相互作用 | 第52-53页 |
| 4.5 讨论 | 第53-55页 |
| 总结与展望 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 个人简况及联系方式 | 第67-70页 |
