| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 美国白蛾简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 美国白蛾发生与为害状况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 美国白蛾防治现状 | 第14-15页 |
| 1.2 苏云金杆菌及杀虫蛋白概述 | 第15-24页 |
| 1.2.1 苏云金杆菌Bt概况 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Bt杀虫蛋白种类 | 第16-18页 |
| 1.2.3 Bt杀虫晶体蛋白的进化 | 第18页 |
| 1.2.4 Bt杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第18-20页 |
| 1.2.5 Bt杀虫晶体蛋白作用机制 | 第20-22页 |
| 1.2.6 Bt杀虫蛋白增效途径 | 第22-24页 |
| 1.3 Bt杀虫蛋白在昆虫中肠受体 | 第24-28页 |
| 1.3.1 氨肽酶N(AminopeptidaseN,APN) | 第24-25页 |
| 1.3.2 钙粘蛋白(Cadherin,CAD) | 第25-26页 |
| 1.3.3 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP) | 第26页 |
| 1.3.4 ABC转运体(ATP-binding cassette transporter,ABC) | 第26-28页 |
| 1.3.5 其它受体蛋白 | 第28页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 对美国白蛾高效活性Bt菌株的筛选 | 第29-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第29页 |
| 2.1.2 供试菌株 | 第29页 |
| 2.1.3 培养基 | 第29页 |
| 2.1.4 主要溶液及试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2.2.1 Bt菌株对美国白蛾杀虫活性测定 | 第30-31页 |
| 2.2.2 Bt菌株晶体形态观察 | 第31页 |
| 2.2.3 Bt菌株cry基因型鉴定 | 第31页 |
| 2.2.4 Bt菌株晶体蛋白SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-33页 |
| 2.3.1 Bt菌株对美国白蛾杀虫活性测定 | 第31-32页 |
| 2.3.2 Bt菌株晶体形态观察 | 第32-33页 |
| 2.3.3 Bt菌株cry基因型鉴定 | 第33页 |
| 2.3.4 Bt菌株晶体蛋白SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 对美国白蛾高效Cry1Ab35蛋白的表达及活性分析 | 第35-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第35页 |
| 3.1.2 菌株及质粒 | 第35页 |
| 3.1.3 培养基 | 第35页 |
| 3.1.4 主要溶液及试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 Bt菌株质粒的提取 | 第36页 |
| 3.2.2 cry1Ab35基因的克隆与原核表达 | 第36-38页 |
| 3.2.3 Bt工程菌HD1Ab35的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.4 Bt工程菌HD1Ab35晶体蛋白提取 | 第39页 |
| 3.2.5 Cry1Ab35蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| 3.2.6 Cry1Ab35蛋白抗体的制备 | 第39页 |
| 3.2.7 Cry1Ab35蛋白杀虫活性测定 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 cry1Ab35基因的克隆与序列分析 | 第39-41页 |
| 3.3.2 cry1Ab35基因的原核表达 | 第41页 |
| 3.3.3 工程菌HD1Ab35的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 工程菌HD1Ab35晶体蛋白形态观察 | 第42页 |
| 3.3.5 工程菌HD1Ab35晶体蛋白的表达及定量 | 第42-43页 |
| 3.3.6 Cry1Ab35蛋白杀虫活性测定 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 4 Cry1Ab35蛋白对美国白蛾杀虫活性增效因子 | 第45-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第45页 |
| 4.1.2 菌株及质粒 | 第45页 |
| 4.1.3 昆虫病毒 | 第45页 |
| 4.1.4 主要溶液及试剂 | 第45页 |
| 4.1.5 主要仪器设备 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 TnGV的增殖、提取与纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.2 TnGV Enhancin蛋白的制备 | 第46页 |
| 4.2.3 Bt GS36菌株enhancin-like基因的克隆 | 第46-47页 |
| 4.2.4 Enhancin-like蛋白的原核表达 | 第47页 |
| 4.2.5 Enhancin-like蛋白的提取与纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.6 三种增效因子在Cry1Ab35蛋白对美国白蛾杀虫活性中的增效作用分析 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.3.1 TnGV Enhancin蛋白的检测 | 第48-49页 |
| 4.3.2 enhancin-like基因的克隆及序列分析 | 第49-50页 |
| 4.3.3 enhancin-like基因的原核表达 | 第50-51页 |
| 4.3.5 三种增效因子在Cry1Ab35蛋白对美国白蛾杀虫活性中的增效作用 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-55页 |
| 5 美国白蛾中肠Cry1Ab35蛋白结合蛋白的鉴定 | 第55-71页 |
| 5.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第55页 |
| 5.1.2 菌株及质粒 | 第55页 |
| 5.1.3 主要溶液及试剂 | 第55-56页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-60页 |
| 5.2.1 Cry1Ab35蛋白的活化 | 第56页 |
| 5.2.2 美国白蛾中肠BBMV蛋白的提取 | 第56页 |
| 5.2.3 Ligandblot检测Cry1Ab35蛋白结合蛋白 | 第56-57页 |
| 5.2.4 Cry1Ab35蛋白结合蛋白LC-MS/MS分析 | 第57页 |
| 5.2.5 美国白蛾幼虫及组织样本制备 | 第57页 |
| 5.2.6 美国白蛾总RNA的提取及cDNA合成 | 第57-58页 |
| 5.2.7 hcapns基因的克隆与序列分析 | 第58-59页 |
| 5.2.8 hcapns基因时空表达分析 | 第59-60页 |
| 5.2.9 饲喂美国白蛾幼虫Cry1Ab35蛋白后hcapns基因表达分析 | 第60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-69页 |
| 5.3.1 Cry1Ab35蛋白的活化 | 第60-61页 |
| 5.3.2 美国白蛾中肠BBMV蛋白的检测 | 第61页 |
| 5.3.3 Cry1Ab35蛋白美国白蛾中肠BBMV结合蛋白的鉴定 | 第61-62页 |
| 5.3.4 美国白蛾中肠Cry1Ab35蛋白结合蛋白质谱分析 | 第62-63页 |
| 5.3.5 hcapns基因的克隆 | 第63-64页 |
| 5.3.6 hcapns基因序列分析 | 第64-67页 |
| 5.3.7 hcapns基因时空表达分析 | 第67页 |
| 5.3.8 饲喂美国白蛾幼虫Cry1Ab35蛋白后hcapns基因表达水平分析 | 第67-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-70页 |
| 5.5 小结 | 第70-71页 |
| 6 美国白蛾HcAPNs蛋白的表达及功能分析 | 第71-85页 |
| 6.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 6.1.1 供试昆虫 | 第71页 |
| 6.1.2 菌株及质粒 | 第71页 |
| 6.1.3 培养基及试剂 | 第71-72页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第72页 |
| 6.2 实验方法 | 第72-76页 |
| 6.2.1 重组HcAPNs蛋白在昆虫细胞系Sf9中的表达 | 第72-74页 |
| 6.2.2 重组HcAPNs蛋白与Cry1Ab35蛋白结合分析 | 第74页 |
| 6.2.3 hcapns基因RNAi及功能分析 | 第74-76页 |
| 6.3 结果与分析 | 第76-82页 |
| 6.3.1 重组Bacmid-hcapns的构建 | 第76-77页 |
| 6.3.2 重组HcAPNs蛋白在昆虫细胞系Sf9中的表达 | 第77-78页 |
| 6.3.3 重组HcAPNs蛋白与Cry1Ab35蛋白结合分析 | 第78页 |
| 6.3.4 dsRNA的合成及检测 | 第78-79页 |
| 6.3.5 注射美国白蛾幼虫dsRNA-hcapns后hcapns基因表达水平检测 | 第79-81页 |
| 6.3.6 注射dsRNA-hcapns美国白蛾幼虫对Cry1Ab35蛋白敏感性测定 | 第81-82页 |
| 6.4 讨论 | 第82-84页 |
| 6.5 小结 | 第84-85页 |
| 全文结论 | 第85-86页 |
| 本研究创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-116页 |
| 在读期间已发表论文 | 第116-117页 |
| 作者简历 | 第117-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
