| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·研究背景 | 第9-11页 |
| ·V-ATP酶的结构 | 第9页 |
| ·V-ATP酶的功能 | 第9-10页 |
| ·V-ATP酶的活性调节方式 | 第10-11页 |
| ·V-ATP酶的研究展望 | 第11页 |
| ·RAVE的研究进展 | 第11-14页 |
| ·RAVE的发现与命名 | 第11-12页 |
| ·RAVE的结构 | 第12-13页 |
| ·RAVE的功能 | 第13-14页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第14-15页 |
| ·pET表达系统原理与特点 | 第14页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌中表达的主要因素 | 第14-15页 |
| ·研究思路与内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-25页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌种与质粒 | 第16页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·主要溶液配制 | 第16-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-25页 |
| ·酿酒酵母基因组的提取 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18-19页 |
| ·skp1和rav2的PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌JM109和BL21(DE3)高效感受态细胞的制备及转化 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的构建与验证 | 第21-22页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第22-23页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| ·Rav2p的生物信息学分析 | 第24页 |
| ·其它方法 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-42页 |
| ·酿酒酵母中Skp1p基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第25-28页 |
| ·skp1的克隆 | 第25页 |
| ·重组质粒pET-21cS1的构建 | 第25-26页 |
| ·Skp1p的表达 | 第26-28页 |
| ·Skp1p的纯化 | 第28页 |
| ·酿酒酵母中Rav2p基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第28-36页 |
| ·rav2的克隆 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pUCTR2的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pET-21cR2的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| ·Rav2p的表达 | 第31页 |
| ·Rav2p表达条件的优化 | 第31-33页 |
| ·Rav2p的纯化 | 第33页 |
| ·Rav2p的生物信息学研究 | 第33-36页 |
| ·酿酒酵母中Skp1p和Rav2p在大肠杆菌中的共表达 | 第36-42页 |
| ·重组质粒pETDuet-R2S1构建过程示意图 | 第36-37页 |
| ·rav2基因的克隆 | 第37页 |
| ·重组质粒pETDuet-R2的构建与鉴定 | 第37页 |
| ·Rav2p的表达 | 第37-38页 |
| ·skp1基因的克隆 | 第38页 |
| ·重组质粒pETDuet-R2S1的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·Rav2p与Skp1p在大肠杆菌中的共表达 | 第39-42页 |
| 主要结论和展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录1:测序图谱 | 第49-52页 |
| 附录2:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
