| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| ·A.niger α-葡萄糖苷酶简介 | 第10-12页 |
| ·A.niger α-葡萄糖苷酶的性质 | 第10页 |
| ·A.niger α-葡萄糖苷酶的应用 | 第10-11页 |
| ·A.niger α-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第11-12页 |
| ·P.pastoris表达系统 | 第12-14页 |
| ·P.pastoris表达系统简介 | 第12-13页 |
| ·P.pastoris发酵优化策略 | 第13-14页 |
| ·立题依据及意义 | 第14-15页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·培养方法 | 第16-18页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·培养方法 | 第17-18页 |
| ·分子生物学操作 | 第18-21页 |
| ·A.niger总RNA的提取 | 第18页 |
| ·RT-PCR扩增α-葡萄糖苷酶cDNA | 第18-19页 |
| ·PCR产物回收 | 第19页 |
| ·重组载体构建 | 第19页 |
| ·化转E.coli感受态细胞 | 第19页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组P.pastoris的构建与筛选 | 第20-21页 |
| ·分析方法 | 第21-24页 |
| ·酵母细胞光密度分析 | 第21页 |
| ·酵母细胞干重测定 | 第21页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第21页 |
| ·pNPG水解酶活力测定方法 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第22页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的纯化 | 第22页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶分子量的测定 | 第22页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶糖基化分析 | 第22页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的液相分析 | 第22-23页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的最适温度和热稳定性分析 | 第23页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的最适pH和pH稳定性分析 | 第23页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的动力学分析 | 第23页 |
| ·金属离子对重组α-葡萄糖苷酶的影响 | 第23页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的转苷反应 | 第23页 |
| ·HPLC检测转苷产物 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-44页 |
| ·A.niger α-葡萄糖苷酶cDNA的克隆及表达 | 第24-27页 |
| ·A.niger总RNA的提取 | 第24页 |
| ·α-葡萄糖苷酶cDNA的克隆 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pPIC9K-aglu的构建与筛选 | 第25-26页 |
| ·重组P.pastoris的构建与筛选 | 第26-27页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的表达验证 | 第27页 |
| ·重组P.pastoris发酵生产α-葡萄糖苷酶的初步研究 | 第27-35页 |
| ·α-葡萄糖苷酶在重组P.pastoris中高效表达的关键因素研究 | 第28-31页 |
| ·重组P.pastoris高密度发酵生产α-葡萄糖苷酶的初步研究 | 第31-34页 |
| ·30L罐发酵生产重组α-葡萄糖苷酶的研究 | 第34-35页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶酶学性质研究 | 第35-40页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的纯化 | 第35页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶分子量的测定 | 第35-36页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的液相分析 | 第36-37页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶糖基化分析 | 第37-38页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的最适温度及热稳定性 | 第38页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的最适pH及pH稳定性 | 第38-39页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的动力学分析 | 第39页 |
| ·金属离子对重组α-葡萄糖苷酶的影响 | 第39-40页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶制备IMOs的条件研究 | 第40-44页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶的转苷能力分析 | 第40-41页 |
| ·pH对重组酶转苷反应的影响 | 第41页 |
| ·温度对重组酶转苷反应的影响 | 第41-42页 |
| ·加酶量对重组酶转苷反应的影响 | 第42-43页 |
| ·重组α-葡萄糖苷酶转苷能力与市售酶的比较 | 第43-44页 |
| 第四章 结论及展望 | 第44-46页 |
| ·结论 | 第44-45页 |
| ·展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
