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microRNA在β-榄香烯抑制小鼠视网膜新生血管形成中的异常表达及其分子机制的实验研究

摘要第4-8页
Abstract第8-12页
英文缩略词第13-18页
第一部分:β-榄香烯抑制鼠视网膜新生血管形成的研究第18-28页
    1 前言第18-19页
    2 材料与方法第19-22页
        2.1 实验材料第19页
            2.1.1 实验动物及分组第19页
            2.1.2 主要仪器及用品第19页
        2.2 实验方法第19-21页
            2.2.1 动物模型建立第19-20页
            2.2.2 视网膜组织石蜡切片及HE染色第20-21页
        2.3 ADP酶染色视网膜铺片第21页
        2.4 视网膜超薄切片的制备及透射电镜观察第21页
        2.5 统计学分析方法第21-22页
    3 结果第22-25页
        3.1 组织学检查及视网膜新生血管内皮细胞核计数第22页
        3.2 ADP酶视网膜铺片第22-23页
        3.3 电镜观察第23-25页
    4 讨论第25-27页
    5 结论第27-28页
第二部分:microRNA在β-榄香烯抑制小鼠视网膜新生血管形成中表达差异的研究第28-54页
    1 前言第28-29页
    2 材料与方法第29-36页
        2.1 实验材料第29-30页
            2.1.1 主要试剂第29-30页
            2.1.2 仪器第30页
        2.2 实验动物分组及处理第30页
            2.2.1 动物模型建立第30页
            2.2.2 取材第30页
        2.3 microRNA芯片检测第30-33页
            2.3.1 提取总RNA第31页
            2.3.2 RNA质量检测第31-32页
            2.3.3 miRCURYLNA microRNA表达谱芯片实验第32-33页
        2.4 实时定量PCR确认相关miRNA表达差异第33-34页
            2.4.1 使用样品的RNA进行cDNA合成第33-34页
            2.4.2 Realtime PCR反应第34页
        2.5 统计学分析第34-36页
    3 结果第36-49页
        3.1 用于芯片及realtime PCR的RNA质量检测结果第36页
            3.1.1 RNA浓度及纯度检测结果第36页
            3.1.2 RNA电泳检测结果第36页
        3.2 microRNAs芯片筛选结果第36-46页
            3.2.1 模型组与正常组间差异表达的microRNAs第36-40页
            3.2.2 治疗组与模型组相比差异表达的microRNAs第40-45页
            3.2.3 在疾病模型发生过程及治疗过程中表达均发生差异的microRNAs第45-46页
        3.3 Stem loop real time RT-PCR验证部分差异表达的microRNAs第46-49页
    4 讨论第49-53页
        4.1 microRNA在正常眼组织的分布特点第49页
        4.2 microRNA在视网膜疾病中的表达及意义第49-53页
            4.2.1 miRNAs可能与视网膜的新生血管化有关第50页
            4.2.2 miRNAs可能与视网膜色素变性有关第50-51页
            4.2.3 miRNAs可能与视网膜肿瘤有关第51页
            4.2.4 MicroRNA与眼部神经退行性疾病第51-53页
    5 结论第53-54页
第三部分:miR-23a在β-榄香烯抑制小鼠视网膜新生血管形成机制中的作用第54-81页
    1 前言第54-56页
    2 材料与方法第56-68页
        2.1 实验材料第56-58页
            2.1.1 材料第56-58页
        2.2 实验方法第58-67页
            2.2.1 Realtime PCR检测VEGFmRNA表达水平第58-60页
            2.2.2 免疫组化检测VEGF蛋白表达水平第60-61页
            2.2.3 生物信息学预测miRNAs与靶基因的关系第61-62页
            2.2.4 荧光素酶报告分析检测miR-23a对VEGF的靶向调控作用第62-67页
        2.3 统计学分析第67-68页
    3 结果第68-75页
        3.1 各组小鼠视网膜组织中VEGF的mRNA表达水平第68-70页
        3.2 各组小鼠视网膜组织中VEGF的蛋白表达水平第70-71页
        3.3 microRNA靶基因预测结果第71-72页
        3.4 荧光素酶报告分析实验结果第72-75页
            3.4.1 重组荧光素酶表达载体构建成功第72-73页
            3.4.2 萤光素酶报告分析验证miR-23a对VEGF的靶向调控作用第73-75页
    4 讨论第75-80页
        4.1 VEGF在视网膜新生血管形成中的作用第75-77页
        4.2 mir-23a对VEGF的调控第77-78页
        4.3 β-榄香烯可能通过mir-23a发挥对VEGF的调控第78-80页
    5 结论第80-81页
本项目的特色与创新之处第81-82页
参考文献第82-89页
综述第89-94页
    参考文献第92-94页
攻读学位期间取得的研究成果第94-95页
致谢第95-96页
个人简介第96页

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