| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 杆菌肽概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 杆菌肽结构及应用 | 第12-13页 |
| 1.1.2 杆菌肽的合成机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 杆菌肽的代谢及调控 | 第14-15页 |
| 1.2 杆菌肽增产策略 | 第15-19页 |
| 1.2.1 杆菌肽发酵工艺的优化 | 第15-17页 |
| 1.2.2 杆菌肽生产菌株的选育 | 第17-19页 |
| 1.3 发酵过程中ATP的作用 | 第19-20页 |
| 1.4 TCA循环的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.4.1 TCA循环的调控 | 第21-23页 |
| 1.5 本课题的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第2章 材料和方法 | 第24-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第25-27页 |
| 2.1.3 工具酶和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 培养基配方及培养条件 | 第28页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 分子生物学方法 | 第29-31页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 地衣芽胞杆菌工程菌的构建 | 第32页 |
| 2.2.4 发酵培养条件 | 第32-33页 |
| 2.2.5 氨基酸检测方法 | 第33-34页 |
| 2.2.6 RNA检测方法 | 第34-36页 |
| 2.2.7 液相色谱分析方法 | 第36-37页 |
| 2.2.8 ICDH酶活测定 | 第37页 |
| 2.2.9 NADPH及ATP测定 | 第37-38页 |
| 2.2.10 数据处理 | 第38-39页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第39-57页 |
| 3.1 过表达TCA循环关键酶重组地衣芽胞杆菌的构建及发酵验证 | 第39-41页 |
| 3.1.1 柠檬酸合成酶及异柠檬酸脱氢酶基因工程菌株构建 | 第39-40页 |
| 3.1.2 柠檬酸合成酶及异柠檬酸脱氢酶过表达基因工程菌株的发酵特性 | 第40-41页 |
| 3.2 icd基因整合菌株的构建及发酵验证 | 第41-47页 |
| 3.2.1 icd基因整合表达质粒和基因工程菌株的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.2 icd基因整合表达菌株的特性 | 第44-47页 |
| 3.3 icd基因整合表达菌株ATP及NADPH检测 | 第47页 |
| 3.4 icd基因整合表达菌株杆菌肽合成和TCA循环相关基因的相对转录量 | 第47-50页 |
| 3.5 icd基因整合表达菌株胞内胞外氨基酸含量 | 第50-52页 |
| 3.6 TCA途径添补反应增强的地衣芽胞杆菌的构建及发酵验证 | 第52-57页 |
| 3.6.1 丙酮酸羧化酶过表达质粒的构建与基因工程菌株的构建 | 第53页 |
| 3.6.2 丙酮酸羧化酶游过表达基因工程菌株的发酵特性 | 第53-57页 |
| 第4章 结论与展望 | 第57-60页 |
| 4.1 结论 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
