| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-28页 |
| 1.1 非天然氨基酸 | 第19-20页 |
| 1.1.1 非天然氨基酸的合成 | 第19页 |
| 1.1.2 化学法 | 第19页 |
| 1.1.3 生物法 | 第19-20页 |
| 1.2 生物催化剂:转氨酶 | 第20-21页 |
| 1.2.1 芳香族氨基酸转氨酶 | 第20页 |
| 1.2.2 芳香族氨基酸转氨酶的应用 | 第20-21页 |
| 1.3 转氨酶合成的弊端 | 第21页 |
| 1.4 多酶反应体系的构建 | 第21-22页 |
| 1.5 合成非天然氨基酸的研究内容 | 第22页 |
| 1.6 甲苯的性质和危害 | 第22-23页 |
| 1.7 甲苯的处理方法 | 第23页 |
| 1.7.1 传统途径 | 第23页 |
| 1.7.2 生物途径 | 第23页 |
| 1.8 甲苯的降解 | 第23-25页 |
| 1.8.1 甲苯的有氧降解途径 | 第23-24页 |
| 1.8.2 甲苯的厌氧降解途径 | 第24-25页 |
| 1.9 芽孢杆菌降解甲苯的潜力 | 第25页 |
| 1.10 邻苯二酚2,3-双加氧酶性质与结构 | 第25-26页 |
| 1.10.1 不同来源的邻苯二酚2,3-双加氧酶 | 第25-26页 |
| 1.10.2 邻苯二酚2,3-双加氧酶的结构和功能 | 第26页 |
| 1.10.3 邻苯二酚2,3-双加氧酶的应用 | 第26页 |
| 1.11 甲苯降解菌的研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 大肠杆菌转氨酶在有机/水两相中不对称合成非天然氨基酸的研究 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料,仪器与试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.1 实验菌株和载体 | 第28-29页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第30页 |
| 2.1.4 所用培养基及配置 | 第30页 |
| 2.1.5 主要溶液及其配置 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.2 大肠杆菌芳香族氨基酸转氨酶(AroAT)的表达和纯化 | 第31页 |
| 2.2.3 偶联酶:α-酮戊二酸脱氢酶(HGDH)的表达和纯化 | 第31页 |
| 2.2.4 酶动力学常数的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.5 测定有机耐受性试验中的酶活性和稳定性 | 第32页 |
| 2.2.6 酮戊二酸的溶解度测定方法 | 第32页 |
| 2.2.7 HPLC分析 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第33-42页 |
| 2.3.1 tyrB基因的扩增 | 第33页 |
| 2.3.2 大肠杆菌芳香族转氨酶的表达,纯化与特性研究 | 第33-35页 |
| 2.3.3 偶联酶α-酮戊二酸脱氢酶对有机溶剂的耐受性 | 第35-37页 |
| 2.3.4 大肠杆菌芳香族转氨酶对有机溶剂耐受性 | 第37-39页 |
| 2.3.5 L-酪氨酸的不对称合成 | 第39-41页 |
| 2.3.6 测定多酶反应体系所产生最终产物的转化率 | 第41-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 甲苯降解菌的筛选、鉴定与降解特性的研究 | 第44-84页 |
| 3.1 实验材料,仪器与试剂 | 第44-51页 |
| 3.1.1 样品来源 | 第44页 |
| 3.1.2 实验菌株和载体 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第45页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第45-46页 |
| 3.1.5 所用培养基及配置 | 第46-48页 |
| 3.1.6 主要溶液及其配置 | 第48-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-59页 |
| 3.2.1 甲苯降解菌的筛选 | 第51页 |
| 3.2.2 细菌总DNA的抽取 | 第51页 |
| 3.2.3 PCR扩增 | 第51-52页 |
| 3.2.4 16S rDNA测序及芽孢杆菌的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.2.5 菌株降解甲苯能力的检测方法 | 第54-55页 |
| 3.2.6 不同条件下检测菌株降解甲苯的能力 | 第55页 |
| 3.2.7 甲苯降解过程中酶的活性检测方法 | 第55-56页 |
| 3.2.8 菌株邻苯二酚2,3-双加氧酶(C23O)的检测方法 | 第56页 |
| 3.2.9 载体的构建方法 | 第56-57页 |
| 3.2.10 邻苯二酚2,3-双加氧酶的纯化步骤 | 第57-58页 |
| 3.2.11 邻苯二酚2,3-双加氧酶的性质研究 | 第58-59页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第59-82页 |
| 3.3.1 甲苯降解菌的富集和筛选 | 第59-60页 |
| 3.3.2 菌株16S rDNA基因序列分析 | 第60-63页 |
| 3.3.3 细菌的生理生化特性 | 第63-72页 |
| 3.3.4 菌株降解甲苯能力比较 | 第72-73页 |
| 3.3.5 理化因素对菌株降解甲苯能力影响 | 第73-76页 |
| 3.3.6 细菌所含酶的检测 | 第76-77页 |
| 3.3.7 编码邻苯二酚2,3-双加氧酶基因的表达载体的构建 | 第77-79页 |
| 3.3.8 细菌邻苯二酚2,3-双加氧酶的纯化 | 第79页 |
| 3.3.9 邻苯二酚2,3-双加氧酶酶学性质 | 第79-82页 |
| 3.4 本章小结 | 第82-84页 |
| 第四章 结论与展望 | 第84-86页 |
| 4.1 多酶反应体系在有机溶剂/水相双相中不对称合成非天然氨基酸 | 第84页 |
| 4.2 甲苯降解菌的研究 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 附录1: 核酸序列 | 第92-94页 |
| 附录2: 研究生期间取得的科研成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
