| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 螺原体的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1.1 螺原体类微生物的生物学特性及致病性 | 第14-15页 |
| 1.1.2 螺原体致病机制的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2 中华绒螯蟹螺原体S.eriocheiris的研究现状 | 第18-21页 |
| 1.2.1 S. eriocheiris的发现与命名 | 第18页 |
| 1.2.2 S. eriocheiris的比较基因组学研究 | 第18-19页 |
| 1.2.3 S. eriocheiris侵染靶细胞模型的建立 | 第19-20页 |
| 1.2.4 S. eriocheiri类黏附蛋白ALP (adesin-like protein)的序列分析、克隆、表达 | 第20页 |
| 1.2.5 S.eriocheiri侵染机理研究 | 第20-21页 |
| 1.3 基因芯片技术研究进展 | 第21-26页 |
| 1.3.1 基因芯片技术简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 表达谱芯片技术 | 第22-23页 |
| 1.3.3 miRNA芯片技术 | 第23-25页 |
| 1.3.4 其他类型基因芯片 | 第25-26页 |
| 1.4 基因芯片数据处理 | 第26-27页 |
| 1.5 RNA芯片联合分析 | 第27-28页 |
| 1.6 本论文的研究目的、意义、内容和技术路线 | 第28-30页 |
| 第2章 基于表达谱芯片技术研究中华绒螯蟹螺原体侵染3T6细胞的机制 | 第30-56页 |
| 2.1 主要实验材料、仪器与试剂 | 第30-34页 |
| 2.1.1 菌株及细胞株 | 第30页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要试剂配方 | 第31-33页 |
| 2.1.4 数据库和分析软件 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.2.1 小鼠3T6细胞细胞培养与S.eriocheiris的侵染 | 第34-35页 |
| 2.2.2 表达谱芯片分析 | 第35-40页 |
| 2.3 实验结果 | 第40-53页 |
| 2.3.1 S.eriocheiris诱导3T6细胞凋亡及对细胞活力的影响 | 第40-42页 |
| 2.3.2 S.eriocheiris侵染3T6细胞后mRNA的差异表达 | 第42-53页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第53-56页 |
| 第3章 中华绒螯蟹螺原体侵染3T6细胞过程中差异microRNA的筛选 | 第56-76页 |
| 3.1 主要实验材料、仪器与试剂 | 第56-57页 |
| 3.1.1 菌株及细胞株 | 第56页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第56页 |
| 3.1.3 主要试剂配方 | 第56页 |
| 3.1.4 数据库和分析软件 | 第56-57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 3.2.1 小鼠3T6细胞细胞培养与S.eriocheiris的侵染 | 第57页 |
| 3.2.2 3T6细胞Total RNA的提取 | 第57页 |
| 3.2.3 RNA纯化 | 第57页 |
| 3.2.4 microRNA芯片实验 | 第57-58页 |
| 3.2.5 数据分析方法及过程 | 第58-59页 |
| 3.3 实验结果 | 第59-74页 |
| 3.3.1 RNA样品质控 | 第59-60页 |
| 3.3.2 microRNA芯片实验原始数据处理 | 第60-64页 |
| 3.3.3 生物信息数据分析 | 第64-65页 |
| 3.3.4 GO的富集性分析 | 第65-73页 |
| 3.3.5 KEGG的富集分析 | 第73-74页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第74-76页 |
| 第4章 中华绒螯蟹螺原体侵染3T6细胞RNA联合分析及功能验证 | 第76-91页 |
| 4.1 主要实验材料、仪器与试剂 | 第76-78页 |
| 4.1.1 菌株及细胞株 | 第76页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第76页 |
| 4.1.3 主要试剂配方 | 第76-78页 |
| 4.2 实验方法 | 第78-82页 |
| 4.2.1 S.eriocheiris的侵染3T6细胞RNA联合分析 | 第78-79页 |
| 4.2.2 差异mRNA和miRNA的RT-PCR验证 | 第79-81页 |
| 4.2.3 Western blotting实验验证 | 第81-82页 |
| 4.3 实验结果 | 第82-88页 |
| 4.3.1 表达谱芯片及micro RNA芯片联合分析结果 | 第82-83页 |
| 4.3.2 S.eriocheiris感染3T6细胞的Realtime-PCR实验验证 | 第83-85页 |
| 4.3.3 microRNA定量分析结果 | 第85-87页 |
| 4.3.4 Western blotting实验验证基因芯片结果 | 第87-88页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第88-91页 |
| 第5章 中华绒螯蟹螺原体黏附蛋白ALP在侵染3T6细胞过程中的作用 | 第91-100页 |
| 5.1 主要实验材料、仪器与试剂 | 第91-92页 |
| 5.1.1 菌株和细胞株 | 第91页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第91页 |
| 5.1.3 主要试剂配方 | 第91-92页 |
| 5.2 实验方法 | 第92-95页 |
| 5.2.1 小鼠3T6细胞细胞培养与S.eriocheiris侵染 | 第92页 |
| 5.2.2 S.eriocheiris基因组的提取 | 第92-93页 |
| 5.2.3 S.eriocheirisALP基因克隆 | 第93页 |
| 5.2.4 免疫电镜实验 | 第93页 |
| 5.2.5 膜蛋白和胞质蛋白的制备 | 第93-94页 |
| 5.2.6 ALP多抗中和实验 | 第94页 |
| 5.2.7 MTT法检测细胞活力 | 第94-95页 |
| 5.3 实验结果 | 第95-97页 |
| 5.3.1 S.eriocheiris ALP蛋白定位 | 第95-96页 |
| 5.3.2 ALP抗体能抑制S.eriocheiris感染 | 第96页 |
| 5.3.3 MTT法测定3T6细胞活力结果 | 第96-97页 |
| 5.4 分析与讨论 | 第97-100页 |
| 第6章 中华绒螯蟹螺原体黏附蛋白ALP互作蛋白的筛选及功能鉴定 | 第100-119页 |
| 6.1 主要实验材料、仪器与试剂 | 第100-102页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第100-101页 |
| 6.1.2 主要仪器设备 | 第101页 |
| 6.1.3 主要试剂配方 | 第101-102页 |
| 6.2 实验方法 | 第102-109页 |
| 6.2.1 酵母双杂交实验 | 第102-105页 |
| 6.2.2 重组蛋白的表达及多肽片段的合成 | 第105-106页 |
| 6.2.3 Far-Western Blotting分析 | 第106-107页 |
| 6.2.4 荧光共定位分析 | 第107页 |
| 6.2.5 Western Blotting分析 | 第107-108页 |
| 6.2.6 FBLN7蛋白表达趋势 | 第108-109页 |
| 6.3 实验结果 | 第109-116页 |
| 6.3.1 酵母双杂交系统筛选S. eriocheiris ALP互作蛋白 | 第109-110页 |
| 6.3.2 重组蛋白表达和纯化 | 第110-112页 |
| 6.3.3 ALP互作蛋白的确定与分析 | 第112-113页 |
| 6.3.4 ALP重组蛋白刺激3T6细胞结果 | 第113-114页 |
| 6.3.5 ALP重组蛋白通过与EGF相互作用抑制EGFR通路 | 第114-115页 |
| 6.3.6 FBLN7在小鼠发育过程中的表达 | 第115-116页 |
| 6.4 分析与讨论 | 第116-119页 |
| 第7章 全文总结 | 第119-121页 |
| 7.1 主要结论 | 第119页 |
| 7.2 论文创新点 | 第119-120页 |
| 7.3 问题与不足 | 第120页 |
| 7.4 研究展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-136页 |
| 附录A: 本论文中所用的缩略语 | 第136-138页 |
| 附录B: 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
