| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第15-17页 |
| 第1章 前言 | 第17-35页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 猪流行性腹泻概述 | 第17-27页 |
| 1.2.1 PED的临床症状 | 第17页 |
| 1.2.2 PED的致病机理 | 第17-18页 |
| 1.2.3 PED的病理变化 | 第18页 |
| 1.2.4 PED流行病学 | 第18页 |
| 1.2.5 PED的流行情况 | 第18-19页 |
| 1.2.6 PEDV病原学特征 | 第19-21页 |
| 1.2.7 PEDV的基因功能研究进展 | 第21-26页 |
| 1.2.8 PED的防控及治疗 | 第26-27页 |
| 1.3 蛋白质组学技术及其应用 | 第27-31页 |
| 1.3.1 蛋白质组学概述 | 第27-28页 |
| 1.3.2 蛋白质组学在病毒研究中的作用 | 第28-29页 |
| 1.3.3 同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)技术 | 第29-31页 |
| 1.4 核内不均一蛋白A1(hnRNPA1) | 第31-32页 |
| 1.4.1 hnRNPA1的结构和功能 | 第31页 |
| 1.4.2 hnRNPA1与冠状病毒 | 第31-32页 |
| 1.5 槲皮素抗病毒的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.5.1 槲皮素概述 | 第32-33页 |
| 1.5.2 槲皮素抗病毒机制 | 第33-34页 |
| 1.6 立题依据 | 第34-35页 |
| 第2章 PEDV强弱毒株感染仔猪空肠组织的蛋白质组学分析 | 第35-67页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第35页 |
| 2.2 试验材料 | 第35-38页 |
| 2.2.1 细胞、毒株 | 第35页 |
| 2.2.2 主要试剂与试剂盒 | 第35-36页 |
| 2.2.3 主要培养基及溶液的配制 | 第36-38页 |
| 2.2.4 主要实验器材 | 第38页 |
| 2.2.5 分子生物学信息软件 | 第38页 |
| 2.3 试验方法 | 第38-49页 |
| 2.3.1 试验动物的病原和抗体检测 | 第38-39页 |
| 2.3.2 PEDV的增殖 | 第39-40页 |
| 2.3.3 病毒滴度测定 | 第40页 |
| 2.3.4 仔猪感染试验 | 第40-41页 |
| 2.3.5 病毒RNA的提取及实时绝对荧光定量PCR | 第41-43页 |
| 2.3.6 细胞总蛋白的提取及定量 | 第43页 |
| 2.3.7 FASP方法酶解 | 第43页 |
| 2.3.8 iTRAQ试剂标记 | 第43-44页 |
| 2.3.9 第一维高PH-RP液相分离 | 第44-45页 |
| 2.3.10 第二维反相液质联用RPLC-MS | 第45页 |
| 2.3.11 生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 2.3.12 WesternBlot试验 | 第47-48页 |
| 2.3.13 统计学分析 | 第48-49页 |
| 2.4 结果与分析 | 第49-63页 |
| 2.4.1 试验动物的抗原和抗体检测 | 第49页 |
| 2.4.2 YN13和YN144的致病力比较 | 第49-53页 |
| 2.4.3 蛋白质组学结果分析 | 第53-56页 |
| 2.4.4 样品间重复性分析 | 第56-57页 |
| 2.4.5 差异蛋白的定义 | 第57-58页 |
| 2.4.6 差异蛋白的亚细胞定位 | 第58页 |
| 2.4.7 差异蛋白的功能特征分析 | 第58-60页 |
| 2.4.8 差异蛋白互作网络分析 | 第60-62页 |
| 2.4.9 差异蛋白的验证 | 第62-63页 |
| 2.5 讨论 | 第63-66页 |
| 2.5.1 细胞免疫应答 | 第63-64页 |
| 2.5.2 细胞骨架应答 | 第64页 |
| 2.5.3 HSP家族和PEDV复制 | 第64-65页 |
| 2.5.4 病毒转录和翻译过程相关蛋白 | 第65-66页 |
| 2.6 小结 | 第66-67页 |
| 第3章 hnRNPA1影响PEDV复制的作用机制研究 | 第67-83页 |
| 3.1 研究目的及意义 | 第67页 |
| 3.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 3.2.1 细胞,毒株和菌株 | 第67页 |
| 3.2.2 载体和质粒 | 第67页 |
| 3.2.3 抗体、siRNA及主要化学试剂 | 第67-68页 |
| 3.2.4 培养基和溶液的配制 | 第68页 |
| 3.2.5 主要实验仪器及设备 | 第68页 |
| 3.3 实验方法 | 第68-76页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建 | 第68-71页 |
| 3.3.2 重组质粒无内毒素提取 | 第71页 |
| 3.3.3 质粒DNA浓度的测定 | 第71-72页 |
| 3.3.4 siRNA及质粒转染 | 第72页 |
| 3.3.5 免疫共沉淀(CO-IP) | 第72-73页 |
| 3.3.6 间接免疫荧光试验与激光共聚焦显微镜观察 | 第73-74页 |
| 3.3.7 细胞总RNA的提取和相对定量PCR | 第74-75页 |
| 3.3.8 病毒RNA的提取及绝对定量PCR | 第75-76页 |
| 3.4 实验结果 | 第76-82页 |
| 3.4.1 hnRNPA1参与PEDV复制过程 | 第76页 |
| 3.4.2 hnRNPA1与PEDVN蛋白的共定位分析 | 第76-77页 |
| 3.4.3 PEDVN蛋白和hnRNPA1互作分析 | 第77-78页 |
| 3.4.4 HnRNPA1沉默 | 第78-79页 |
| 3.4.5 沉默hnRNPA1抑制PEDVYN144毒株的复制 | 第79-80页 |
| 3.4.6 沉默hnRNPA1抑制PEDVYN13和CV777毒株的复制 | 第80-82页 |
| 3.5 讨论 | 第82页 |
| 3.6 小结 | 第82-83页 |
| 第4章 槲皮素抗PEDV研究 | 第83-105页 |
| 4.1 研究目的及意义 | 第83页 |
| 4.2 实验材料 | 第83-85页 |
| 4.2.1 细胞,毒株和菌株 | 第83页 |
| 4.2.2 载体和质粒 | 第83页 |
| 4.2.3 主要试剂和设备 | 第83-84页 |
| 4.2.4 相关试剂的配制 | 第84-85页 |
| 4.3 试验方法 | 第85-91页 |
| 4.3.1 MTT法测定槲皮素的细胞毒性 | 第85页 |
| 4.3.2 病毒滴度的测定 | 第85页 |
| 4.3.3 槲皮素IC50的测定 | 第85-86页 |
| 4.3.4 Westernblot分析 | 第86页 |
| 4.3.5 间接免疫荧光试验 | 第86页 |
| 4.3.6 病毒RNA的提取及实时绝对荧光定量PCR | 第86页 |
| 4.3.7 siRNA及质粒转染 | 第86页 |
| 4.3.8 细胞总RNA的提取和相对荧光定量PCR | 第86-87页 |
| 4.3.9 重组质粒的构建 | 第87-89页 |
| 4.3.10 目的蛋白的表达与纯化 | 第89-90页 |
| 4.3.11 目的蛋白去标签和纯化 | 第90页 |
| 4.3.12 表面等离子体共振试验(Surfaceplasmonresonance,SPR) | 第90-91页 |
| 4.3.13 PEDV3C样蛋白酶的活性检测试验和活性抑制试验 | 第91页 |
| 4.4 试验结果 | 第91-103页 |
| 4.4.1 槲皮素的细胞毒性 | 第91-93页 |
| 4.4.2 槲皮素对PEDV的影响 | 第93-96页 |
| 4.4.3 槲皮素不影响PEDV吸附和入侵宿主细胞 | 第96-97页 |
| 4.4.4 HSPA1和PEDV | 第97-99页 |
| 4.4.5 槲皮素和PEDV3C样蛋白酶结合位点的预测 | 第99-100页 |
| 4.4.6 槲皮素和PEDV3C样蛋白酶相互作用 | 第100-102页 |
| 4.4.7 槲皮素抑制PEDV3C样蛋白酶的活性 | 第102-103页 |
| 4.5 讨论 | 第103-104页 |
| 4.6 小结 | 第104-105页 |
| 第5章 全文总结及展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-127页 |
| 附录 | 第127-144页 |
| 基本信息 | 第144-146页 |
| 致谢 | 第146-148页 |
