| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第15-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-30页 |
| 1.1 设施土壤盐渍化 | 第19-26页 |
| 1.1.1 土壤次生盐渍化基本特征 | 第19页 |
| 1.1.2 设施土壤次生盐渍化形成的原因 | 第19-20页 |
| 1.1.2.1 过量施用化肥 | 第19-20页 |
| 1.1.2.2 设施内特殊的水分运移方式 | 第20页 |
| 1.1.2.3 不合理灌溉 | 第20页 |
| 1.1.3 设施土壤次生盐渍化的危害 | 第20-21页 |
| 1.1.3.1 对蔬菜生长发育的危害 | 第20页 |
| 1.1.3.2 对蔬菜的生理伤害 | 第20-21页 |
| 1.1.4 NO在植物逆境生理中的作用 | 第21-24页 |
| 1.1.4.1 NO与盐胁迫 | 第21-22页 |
| 1.1.4.2 NO与干旱胁迫 | 第22页 |
| 1.1.4.3 NO与渗透胁迫 | 第22-23页 |
| 1.1.4.4 NO与高温胁迫 | 第23页 |
| 1.1.4.5 NO与低温胁迫 | 第23页 |
| 1.1.4.6 NO与重金属胁迫 | 第23-24页 |
| 1.1.5 NO通过对靶蛋白进行翻译后修饰调控蛋白功能 | 第24-26页 |
| 1.1.5.1 蛋白S-亚硝化 | 第24-25页 |
| 1.1.5.2 蛋白硝化 | 第25-26页 |
| 1.2 抗坏血酸—谷胱甘肽循环 | 第26-27页 |
| 1.3 ASA-GSH循环关键酶通过NO对其进行S-亚硝基化、硝化修饰调节酶活性 | 第27-28页 |
| 1.4 本研究目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 外源施加NO对硝酸盐胁迫下番茄ASA-GSH关键酶的影响 | 第30-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.1.1 材料和试剂 | 第31页 |
| 2.1.2 幼苗培养及处理 | 第31页 |
| 2.1.3 测定项目与方法 | 第31-35页 |
| 2.1.3.1 植物总RNA提取 | 第31页 |
| 2.1.3.2 RNA反转成cDNA | 第31-32页 |
| 2.1.3.3 实时荧光定量PCR | 第32页 |
| 2.1.3.4 蛋白含量测定 | 第32页 |
| 2.1.3.5 抗氧化物酶活性的测定 | 第32-33页 |
| 2.1.3.6 MDA含量和H_2O_2含量的测定 | 第33页 |
| 2.1.3.7 胞质的APX1、MDHAR、叶绿体GR抗体的制备和获得 | 第33-34页 |
| 2.1.3.8 生物素转化的方法分离、鉴定番茄幼苗根、叶中S-亚硝基化蛋白 | 第34-35页 |
| 2.1.3.9 硝酸盐胁迫下番茄幼苗根系、叶片中S-亚硝基化蛋白的鉴定 | 第35页 |
| 2.1.4 数据处理与分析 | 第35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-48页 |
| 2.2.1 外源施加SNP对硝酸盐胁迫下番茄幼苗叶、根膜脂化水平和H_2O_2含量的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.2 外源施加SNP对APX、MDHAR、GR基因和蛋白表达及酶活性影响 | 第36-48页 |
| 2.2.2.1 外源施加SNP对硝酸盐胁迫下番茄幼苗叶、根中的APX基因表达、酶活性的影响 | 第36-38页 |
| 2.2.2.2 外源施加SNP对硝酸盐胁迫下番茄幼苗叶、根中的MDHAR基因表达、酶活性、蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 2.2.2.3 外源施加SNP对硝酸盐胁迫下番茄幼苗叶、根中的GR基因表达、酶活性、蛋白表达的影响 | 第39-41页 |
| 2.2.2.4 外源施加SNP对硝酸盐胁迫下番茄幼苗其他抗氧化物酶活性的影响 | 第41-43页 |
| 2.2.2.5 外源施加SNP对番茄S-nitrosylation的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.2.6 番茄S-亚硝基化蛋白鉴定 | 第44-46页 |
| 2.2.2.7 番茄幼苗中GR、APX、MDHARS-亚硝基化western blot检测 | 第46-47页 |
| 2.2.2.8 番茄MDHAR蛋白可能的S-亚硝化位点的软件预测 | 第47-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 番茄胞质抗坏血酸过氧化物酶的原核表达、蛋白纯化及活性的影响 | 第51-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 3.1.2 植物总RNA提取 | 第51-52页 |
| 3.1.3 引物合成及PCR扩增SlAPX基因 | 第52页 |
| 3.1.4 DNA片段回收 | 第52页 |
| 3.1.5 原核表达载体构建 | 第52页 |
| 3.1.6 番茄重组胞质APX蛋白诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.1.7 番茄重组胞质APX蛋白纯化 | 第53页 |
| 3.1.8 用SIN-1和GSNO处理重组蛋白后对其活性的影响 | 第53页 |
| 3.2 结果 | 第53-57页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达与纯化 | 第53-55页 |
| 3.2.2 硝化、S-亚硝化对SlAPX蛋白酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.3 番茄胞质APX1蛋白可能的S-亚硝化、硝化位点的预测 | 第56-57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 APX、MDHAR和GR过表达载体的构建及转基因烟草的鉴定 | 第59-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-60页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第59页 |
| 4.1.2 酶与试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 植物材料 | 第59页 |
| 4.1.4 植物总RNA提取 | 第59页 |
| 4.1.5 RNA反转cDNA | 第59页 |
| 4.1.6 引物合成及PCR扩增slAPX、slMDHAR、slGR基因 | 第59-60页 |
| 4.1.7 DNA片段回收 | 第60页 |
| 4.1.8 质粒pRI101酶切及胶回收 | 第60页 |
| 4.1.9 转基因烟草基因组PCR、western blot检测 | 第60页 |
| 4.1.10 酶活测定 | 第60页 |
| 4.2 结果与分析 | 第60-64页 |
| 4.2.1 pRI101-SlAPX、pRI101-SlMDHAR、pRI101-SlGR植物表达载体的构建 | 第61页 |
| 4.2.2 转基因烟草鉴定 | 第61-64页 |
| 4.2.2.1 SlGR过表达转基因烟草的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2.2.2 SlMDHAR过表达转基因烟草的鉴定 | 第62-63页 |
| 4.2.2.3 SlAPX过表达转基因烟草的鉴定 | 第63-64页 |
| 4.3 结论 | 第64-65页 |
| 第五章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 总结 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-90页 |
| 附录A 攻读硕士期间科研成果 | 第90页 |
