| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶简介 | 第14页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶分类 | 第14-15页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶的结构 | 第15-16页 |
| 1.4 β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第16-18页 |
| 1.5 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第18-22页 |
| 1.5.1 β-葡萄糖苷酶在水解大豆异黄酮中的应用 | 第18页 |
| 1.5.2 β-葡萄糖苷酶在水解淫羊藿黄酮中的应用 | 第18-19页 |
| 1.5.3 β-葡萄糖苷酶在生产白藜芦醇中的应用 | 第19页 |
| 1.5.4 β-葡萄糖苷酶在食品工业生产中的应用 | 第19-20页 |
| 1.5.5 β-葡萄糖苷酶在合成反应中的应用 | 第20页 |
| 1.5.6 立题依据和研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.7 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 常用试剂及酶 | 第22-23页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 培养基和溶液配制 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 查找目的片段 | 第24页 |
| 2.2.2 目的基因的结构域分析及扩增引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.3 链霉菌Streptomyces sp.GXT6的培养和基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 β-葡萄糖苷酶基因的克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.5 重组质粒的构建 | 第26页 |
| 2.2.6 重组质粒的转化及酶切验证 | 第26-27页 |
| 2.2.7 重组菌株的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.8 重组酶的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.9 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第28页 |
| 2.2.10 蛋白质标准曲线的制作及定量分析 | 第28-29页 |
| 2.2.11 β-葡萄糖苷酶的酶学性质测定 | 第29-32页 |
| 2.2.12 β-葡萄糖苷酶对植物提取物水解功能研究 | 第32-34页 |
| 2.2.13 β-葡萄糖苷酶转糖苷功能研究 | 第34-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-67页 |
| 3.1 β-葡萄糖苷酶基因克隆及表达 | 第37-41页 |
| 3.1.1 β-葡萄糖苷酶基因编码蛋白质结构分析 | 第37-38页 |
| 3.1.2 链霉菌Streptomyces sp.GXT6基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.1.3 目的基因的克隆 | 第39-40页 |
| 3.1.4 重组质粒的构建和验证 | 第40-41页 |
| 3.2 β-葡萄糖苷酶的诱导表达和纯化 | 第41-43页 |
| 3.3 重组酶的酶学性质研究 | 第43-55页 |
| 3.3.1 最适酶反应pH和温度的测定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 重组酶的pH稳定性和温度稳定性测定 | 第44-46页 |
| 3.3.3 重组酶的K_m、V_(max)的测定 | 第46-47页 |
| 3.3.4 重组酶的葡萄糖耐受性及葡萄糖抑制常数K_i值的测定 | 第47-49页 |
| 3.3.5 重组酶底物特异性测定 | 第49-51页 |
| 3.3.6 金属离子对重组酶酶活的影响测定 | 第51-52页 |
| 3.3.7 化学试剂及有机试剂对重组酶酶活的影响 | 第52-55页 |
| 3.4 β-葡萄糖苷酶对植物提取物水解功能研究 | 第55-59页 |
| 3.4.1 对甜菊糖苷类物质水解功能研究 | 第55-56页 |
| 3.4.2 对大豆异黄酮类物质水解功能研究 | 第56-58页 |
| 3.4.3 对淫羊藿黄酮类物质水解功能研究 | 第58页 |
| 3.4.4 对虎杖苷水解功能研究 | 第58-59页 |
| 3.5 β-葡萄糖苷酶转糖苷功能研究 | 第59-67页 |
| 3.5.1 对糖类、醇类的转糖苷研究 | 第59-61页 |
| 3.5.2 对儿茶素、咖啡酸、L-抗坏血酸和苯甲酸的转糖苷研究 | 第61-62页 |
| 3.5.3 对烷基糖苷类转糖苷功能研究 | 第62页 |
| 3.5.4 对长链醇转糖苷功能研究 | 第62-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-73页 |
| 4.1 重组酶的底物特异性研究 | 第67-68页 |
| 4.2 重组酶对淫羊藿黄酮类物质水解功能分析 | 第68-69页 |
| 4.3 重组酶对甜菊糖苷类物质水解功能研究 | 第69-70页 |
| 4.4 重组酶的葡萄糖耐受性研究 | 第70-71页 |
| 4.5 β-葡萄糖苷酶转糖苷功能研究 | 第71-73页 |
| 第五章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 5.1 结论 | 第73-74页 |
| 5.2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 附录一 | 第85-89页 |
| 附录二 | 第89-92页 |
| 附录三 | 第92-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第110页 |
