| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 课题研究的目的和意义 | 第10页 |
| 1.2 国内外在该方向的研究现状及分析 | 第10-16页 |
| 1.2.1 抗菌肽的类型及抗菌谱 | 第10-11页 |
| 1.2.2 抗菌肽的抑菌机制 | 第11-12页 |
| 1.2.3 抗菌肽的应用 | 第12-13页 |
| 1.2.4 抗菌肽的重组表达宿主 | 第13-16页 |
| 1.3 重组表达策略 | 第16-18页 |
| 1.3.1 外源表达 | 第16页 |
| 1.3.2 融合表达 | 第16-17页 |
| 1.3.3 杂合表达 | 第17-18页 |
| 1.3.4 共表达 | 第18页 |
| 1.4 安全性评价 | 第18页 |
| 1.5 本课题主要研究内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 产抗菌肽的乳酸菌筛选 | 第19页 |
| 1.5.2 抗菌肽外源表达及活性鉴定 | 第19-20页 |
| 第2章 材料和方法 | 第20-36页 |
| 2.1 材料及仪器 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第20页 |
| 2.1.2 实验仪器及设备 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验材料及试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 本课题所需引物 | 第22页 |
| 2.1.5 试剂的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 菌株的分离 | 第24页 |
| 2.2.2 产抗菌肽乳酸菌的筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.3 菌株生理生化指标鉴定 | 第25页 |
| 2.2.4 菌株 16S rRNA鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 菌株产抗菌肽培养条件的优化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 植物乳杆菌抗菌肽plantaricin E、plantaricin F、plantaricin K、plantaricin J基因片段扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.7 阳性PCR产物的胶回收与T载体连接 | 第28-29页 |
| 2.2.8 抗菌肽基因的原核表达重组质粒的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.9 抗菌肽基因的原核表达 | 第32-33页 |
| 2.2.10 可溶性表达分析 | 第33页 |
| 2.2.11 目标蛋白纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.12 酶切his-sumo-tag | 第34页 |
| 2.2.13 Western blotting验证蛋白表达 | 第34-36页 |
| 第3章 产抗菌肽乳酸菌筛选 | 第36-48页 |
| 3.1 乳酸菌分离 | 第36页 |
| 3.2 产抗菌肽乳酸菌的筛选 | 第36-39页 |
| 3.2.1 乳酸菌的抑菌筛选 | 第36页 |
| 3.2.2 菌株有机酸排除 | 第36-37页 |
| 3.2.3 菌株过氧化氢排除 | 第37-38页 |
| 3.2.4 菌株抗菌物质的蛋白质特性鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 菌株鉴定 | 第39-47页 |
| 3.3.1 菌株形态观察 | 第39页 |
| 3.3.2 菌株生理生化指标鉴定 | 第39页 |
| 3.3.3 菌株 16S rRNA鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.4 菌株产抗菌肽培养条件的优化 | 第41-47页 |
| 3.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 抗菌肽基因的外源表达及活性鉴定 | 第48-65页 |
| 4.1 抗菌肽基因的鉴定与表达重组质粒的构建 | 第48-54页 |
| 4.1.1 植物乳杆菌抗菌肽plantaricin E、plantaricin F、plantaricin K、plantaricin J基因片段扩增及测序鉴定 | 第48-49页 |
| 4.1.2 植物乳杆菌抗菌肽plantaricinE、plantaricin F的表达质粒构建 | 第49-52页 |
| 4.1.3 转化子的验证 | 第52-54页 |
| 4.2 抗菌肽重组质粒的诱导表达及活性鉴定 | 第54-63页 |
| 4.2.1 转化表达菌株 | 第54-55页 |
| 4.2.2 植物乳杆菌plantaricin E、plantaricin F重组质粒的诱导表达 | 第55-59页 |
| 4.2.3 目标蛋白纯化 | 第59-60页 |
| 4.2.4 酶切his-SUMO-tag | 第60-61页 |
| 4.2.5 Western blotting验证蛋白表达正确性 | 第61-62页 |
| 4.2.6 双层牛津杯抑菌实验验证 | 第62-63页 |
| 4.3 本章小结 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
