| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-28页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 蛋白质内含子 | 第12-26页 |
| 1.2.1 蛋白质内含子的发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 蛋白质内含子的分类 | 第13-15页 |
| 1.2.3 蛋白质内含子结构 | 第15-16页 |
| 1.2.4 蛋白质的剪接机理 | 第16-20页 |
| 1.2.5 蛋白质内含子的应用 | 第20-26页 |
| 1.2.6 总结 | 第26页 |
| 1.3 本课题的内容、目的和意义 | 第26-28页 |
| 1.3.1 本课题内容 | 第26页 |
| 1.3.2 本课题的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料、仪器和方法 | 第28-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.2 中间小肽 | 第29页 |
| 2.1.3 试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.5 试剂的配制 | 第31-34页 |
| 2.2 实验技术 | 第34-39页 |
| 2.2.1 化学转化 | 第34页 |
| 2.2.2 PCR | 第34-35页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化 | 第35页 |
| 2.2.4 去模板和磷酸化 | 第35页 |
| 2.2.5 产物连接 | 第35-36页 |
| 2.2.6 质粒抽提 | 第36页 |
| 2.2.7 蛋白纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.8 蛋白质凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.9 WesternBlot | 第38-39页 |
| 2.3 实验设计方案 | 第39-40页 |
| 第三章 实验过程 | 第40-47页 |
| 3.1 前体蛋白的表达 | 第40-42页 |
| 3.1.1 准备表达菌种 | 第40页 |
| 3.1.2 前体蛋白的诱导和表达 | 第40-41页 |
| 3.1.3 N端前体蛋白的纯化 | 第41页 |
| 3.1.4 中间前体蛋白和C端前体蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE检测前体蛋白的表达 | 第42页 |
| 3.2 筛选高效剪接组合 | 第42-43页 |
| 3.3 改造中间前体蛋白 | 第43-45页 |
| 3.4 对改造后的中间前体蛋白表达 | 第45页 |
| 3.5 筛选改造后的中间前体蛋白 | 第45页 |
| 3.6 标记目标蛋白 | 第45-46页 |
| 3.7 鉴定标记结果 | 第46-47页 |
| 第四章 结果与分析 | 第47-68页 |
| 4.1 筛选高效组合 | 第47-58页 |
| 4.1.1 SGS11与RBS1组合 | 第48-49页 |
| 4.1.2 SGS11与SXS1组合 | 第49-50页 |
| 4.1.3 SGS11与TXS1组合 | 第50-51页 |
| 4.1.4 SXS11与RBS1组合 | 第51-52页 |
| 4.1.5 SXS11与SGS1组合 | 第52-53页 |
| 4.1.6 SXS11与TXS1组合 | 第53-54页 |
| 4.1.7 TE3S11与SGS1组合 | 第54-55页 |
| 4.1.8 TE3S11与SXS1组合 | 第55-56页 |
| 4.1.9 TE3S11与TXS1组合 | 第56-57页 |
| 4.1.10 TE3S11与RBS1组合 | 第57-58页 |
| 4.2 构建中间前体蛋白改造质粒(TE3S11、RBS1组合) | 第58-59页 |
| 4.3 筛选最佳中间前体蛋白 | 第59-65页 |
| 4.3.1 HS-TE3S11C-CFKSG-RBS1N蛋白的鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.2 HS-TE3S11C-CFKG-RBS1N蛋白的鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3.3 HS-TE3S11C-CKSG-RBS1N蛋白的鉴定 | 第61页 |
| 4.3.4 HS-TE3S11C-CKG-RBS1N蛋白的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.3.5 HS-TE3S11C-CK-RBS1N蛋白的鉴定 | 第62-63页 |
| 4.3.6 HS-TE3S11C-SFK-RBS1N蛋白的鉴定 | 第63-64页 |
| 4.3.7 HS-TE3S11C-SK-RBS1N蛋白的鉴定 | 第64-65页 |
| 4.4 对MBP和Trx标记FITC | 第65-68页 |
| 4.4.1 WesternBlot和荧光扫描鉴定结果 | 第65-66页 |
| 4.4.2 LC-MS液质联用质谱鉴定 | 第66-68页 |
| 第五章 分析与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 分析讨论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 硕士期间参加科研情况说明 | 第74-75页 |
| 参与的科研项目 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
