| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 性发育的概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 性发育 | 第13页 |
| 1.1.2 性发育分子机制的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 SRSF1的概述 | 第15-19页 |
| 1.2.1 SRSF1蛋白的结构特征 | 第15-16页 |
| 1.2.2 SRSF1主要的分子功能 | 第16-18页 |
| 1.2.3 SRSF1参与的生理病理过程 | 第18-19页 |
| 1.3 高通量筛选技术——iTRAQ | 第19-20页 |
| 1.4 转录组测序——RNA-seq | 第20-21页 |
| 1.5 GT1-7细胞的概述 | 第21页 |
| 1.6 立题背景 | 第21-22页 |
| 1.6.1 SRSF1与性发育 | 第21-22页 |
| 1.6.2 PGT1-7细胞模型的构建 | 第22页 |
| 1.7 研究的内容 | 第22-24页 |
| 1.7.1 构建敲低SRSF1的稳转株 | 第23页 |
| 1.7.2 稳转株的RNA-seq | 第23-24页 |
| 1.7.3 稳转株的iTRAQ | 第24页 |
| 1.7.4 Real-timePCR验证实验结果 | 第24页 |
| 1.8 研究的意义 | 第24-25页 |
| 第2章 材料和方法 | 第25-44页 |
| 2.1 材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制方法及储存 | 第27-28页 |
| 2.1.5 实验所用的计算机软件 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-44页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第28-30页 |
| 2.2.2 稳转株的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 Real-timePCR检测稳转株中SRSF1的表达量 | 第31-35页 |
| 2.2.4 Westernblot检测SRSF1的表达 | 第35-37页 |
| 2.2.5 检测稳转株中性发育相关基因的表达情况 | 第37页 |
| 2.2.6 MTT检测 | 第37页 |
| 2.2.7 转录组分析——RNA-seq | 第37-39页 |
| 2.2.8 蛋白组学分析——iTRAQ | 第39-41页 |
| 2.2.9 数据分析 | 第41-44页 |
| 第3章 结果与分析 | 第44-74页 |
| 3.1 慢病毒介导shRNA稳转GT1-7细胞系的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.1 慢病毒最适MOI | 第44-45页 |
| 3.1.2 慢病毒介导shRNA稳转GT1-7细胞的获得 | 第45页 |
| 3.2 慢病毒介导shRNA稳转GT1-7细胞的验证 | 第45-48页 |
| 3.2.1 SRSF1mRNA水平的验证 | 第45-46页 |
| 3.2.2 SRSF1蛋白质水平的验证 | 第46页 |
| 3.2.3 性发育相关基因的检测 | 第46-47页 |
| 3.2.4 稳转株活力测定 | 第47-48页 |
| 3.3 转录组分析的结果 | 第48-55页 |
| 3.3.1 差异表达基因的筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.2 差异基因的GO分析 | 第49-54页 |
| 3.3.3 差异基因的KEGGpathway分析 | 第54-55页 |
| 3.4 蛋白组学iTRAQ的结果分析 | 第55-71页 |
| 3.4.1 差异表达的蛋白质 | 第55-66页 |
| 3.4.2 差异蛋白的IPA分析 | 第66-71页 |
| 3.5 Real-timePCR验证实验结果 | 第71-74页 |
| 第4章 讨论 | 第74-77页 |
| 4.1 慢病毒介导shRNA构建稳转株 | 第74-75页 |
| 4.1.1 稳转株的构建及检测 | 第74页 |
| 4.1.2 慢病毒介导shRNA的干扰效率 | 第74-75页 |
| 4.2 RNA-seq的结果分析 | 第75页 |
| 4.3 iTRAQ结果分析 | 第75-77页 |
| 第5章 结论和展望 | 第77-79页 |
| 5.1 结论 | 第77页 |
| 5.2 展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 课题来源 | 第89-90页 |
| 学术论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
